[发明专利]检测牛副流感病毒3型抗体的表达蛋白及ELISA试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测牛副流感病毒3型抗体的表达蛋白，是表达牛副流感病毒3型NP基因C'端rNc蛋白的重组大肠菌BL21/pGEX-NP2，其特征在于：rNC蛋白为NP基因C'端编码区的330bp编码的第391-500位氨基酸，其重组质粒为表达NP基因C'端编码区为330碱基的原核表达质粒；其是以一种重组大肠杆菌菌株，即可以特异性表达牛副流感病毒3型NP的C'端rNc蛋白为抗原，能有效地进行病毒感染和疫苗免疫后的诊断。

主权项

检测牛副流感病毒3型抗体的表达蛋白，是表达牛副流感病毒3型NP基因 C'端rNc蛋白的重组大肠菌 BL21/ pGEX‑NP2，其特征在于：rNC蛋白为NP基因C'端编码区的330bp编码的第391‑500位氨基酸，其重组质粒为表达NP基因C'端编码区为 330碱基的原核表达质粒；其具体的构建过程如下：(1)克隆牛副流感病毒3型NP的C'端的DNA 片段:以分离的牛副流感病毒3型基因组为模板RNA，通过RT‑PCR 方法扩增得到N基因C'端330bp 片段含可表达的330bp ，将牛副流感病毒3型NP的C'端的330bp片段与克隆载体pCR‑blunt连接，经限制性内切酶酶切鉴定后，通过测序分析确定该序列碱基无错配，该cDNA 序列与牛副流感病毒3型全基因组在Genebank 中登录号: JQ063064 对应序列完全相同；(2) 构建原核表达载体pGEX‑NP2:将上述测序准确的克隆质粒内的牛副流感病毒3型NP的C'端的330bp片段定向插入原核表达载体pGEX‑6p‑1的BamH I和Sal I多克隆位点之间；(3) 重组大肠杆菌Escherichia coli BL21/ pGEX‑NP2的构建:将步骤(2) 所述的原核表达载体pGEX‑NP2转化至大肠杆菌BL21 感受态细胞，经氨苄青霉素抗性筛选得到阳性重组菌株；(4) 牛副流感病毒3型NP的C'端330bp片段在大肠杆菌BL21中的表达：将步骤(3) 所述的重组大肠杆菌BL21/ pGEX‑NP2在含50mg/ml氨苄青霉素Amp 抗性的LB 液体培养基中培养，经异丙基硫代‑ ß‑O 半乳糖昔IPTG 诱导，Western‑blot 分析，证实该重组大肠杆菌可以特异性地表达牛副流感病毒3型NP基因 C'端rNc蛋白，重组蛋白大小为38KD，以分泌上清的形式存在于大肠杆菌BL21中，且具有良好的免疫学活性。