[发明专利]一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法有效

专利信息
申请号: 201410208059.X 申请日: 2014-05-18
公开(公告)号: CN104232749A 公开(公告)日: 2014-12-24
发明(设计)人: 付强;邹颉;陈洪 申请(专利权)人: 贵州省烟草科学研究院
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 550032 贵州省贵阳*** 国省代码: 贵州;52
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摘要: 发明公开了一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法,以烟草突变群体的DNA序列为模板,设计NtGt1a基因特异性引物,通过PCR仪进行扩增,扩增后PCR产物首先高温变性,缓慢降低温度复性,然后利用限制性内切酶CELI进行酶切,对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序,将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对,确定发生突变的类型,本发明的检测方法具有准确快速,易操作,重复性高,通量大的优点。
搜索关键词: 一种 烟草 ntgt1a 基因 碱基 替换 突变 检测 方法
【主权项】:
一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法,其特征在于:以烟草突变群体的DNA序列为模板,设计NtGt1a基因特异性引物,通过PCR仪进行扩增,扩增后PCR产物首先高温变性,缓慢降低温度复性,然后利用限制性内切酶CELI进行酶切,对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序,将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对,确定发生突变的类型,所述的烟草NtGt1a基因特异性引物为:上游引物NtGt1a‑F: 5’ – CAACCTGAGACCTCTGTTAGTATG ‑3’   24bp下游引物NtGt1a‑R: 5’ – CCTTCTAATAACGCTGCTCTACT ‑3’    23bp    。
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