[发明专利]一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法有效
| 申请号: | 201410208059.X | 申请日: | 2014-05-18 |
| 公开(公告)号: | CN104232749A | 公开(公告)日: | 2014-12-24 |
| 发明(设计)人: | 付强;邹颉;陈洪 | 申请(专利权)人: | 贵州省烟草科学研究院 |
| 主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
| 代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
| 地址: | 550032 贵州省贵阳*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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| 摘要: | 本发明公开了一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法,以烟草突变群体的DNA序列为模板,设计NtGt1a基因特异性引物,通过PCR仪进行扩增,扩增后PCR产物首先高温变性,缓慢降低温度复性,然后利用限制性内切酶CELI进行酶切,对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序,将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对,确定发生突变的类型,本发明的检测方法具有准确快速,易操作,重复性高,通量大的优点。 | ||
| 搜索关键词: | 一种 烟草 ntgt1a 基因 碱基 替换 突变 检测 方法 | ||
【主权项】:
一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法,其特征在于:以烟草突变群体的DNA序列为模板,设计NtGt1a基因特异性引物,通过PCR仪进行扩增,扩增后PCR产物首先高温变性,缓慢降低温度复性,然后利用限制性内切酶CELI进行酶切,对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序,将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对,确定发生突变的类型,所述的烟草NtGt1a基因特异性引物为:上游引物NtGt1a‑F: 5’ – CAACCTGAGACCTCTGTTAGTATG ‑3’ 24bp下游引物NtGt1a‑R: 5’ – CCTTCTAATAACGCTGCTCTACT ‑3’ 23bp 。
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