[发明专利]一种人类8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的比色分析方法

摘要

本发明属于生物领域，涉及一种人类8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的比色分析方法。向0.1～5.0μM的S1中加入0.1～5.0μM的S2，85～100℃反应0.5～2min，10～30℃反应1～5min，交替反应8～15次，再加入hOGG1、BSA和NaBH₃CN，35～40℃反应0.5～5h，80～100℃加热1～10min。加入ExoI和ExoIII，35～40℃静置10～60min，加入石墨烯/纳米金，混合均匀。依次加入显色剂和H₂O₂，进行吸光度测定。本发明的比色分析法比传统无机纳米材料分析方法成本低、操作简单、实用性强。

主权项

一种人类8‑氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的比色分析方法，其特征在于，步骤如下：(1)向0.1～5.0μM的DNA序列S1溶液中加入浓度为0.1～5.0μM的DNA序列S2溶液，在85～100℃温度下反应0.5～2min，继续在10～30℃温度下反应1～5min，如此温度交替反应8～15次，使DNA序列S1与DNA序列S2杂交反应成双链DNA；其中，所述的DNA序列S1为含有8‑氧代鸟嘌呤的DNA序列，DNA序列S2为DNA序列S1的互补DNA序列；(2)依次向步骤(1)获得的双链DNA溶液中加入活性值不大于0.5U/μL的hOGG1、0.01～1.0mg/mL牛血清蛋白和0.01～1.0M氰基硼氢化钠，在35～40℃温度下反应0.5～5h，使hOGG1捕获到DNA序列S1上；然后在80～100℃温度下反应1～10min，终止反应；(3)向步骤(2)获得的混合液中加入0.05～1.5U/μL核酸外切酶I和0.2～8.0U/μL核酸外切酶III，35～40℃温度下静置10～60min；再加入0.5～40.0μg/mL石墨烯/纳米金，混合均匀；(4)向步骤(3)得到的产物中依次加入0.05～10.0mM显色剂和1.0～100.0mM过氧化氢，将得到的混合液立即进行吸光度测定。