[发明专利]一种山羊MSTN基因定点修饰系统及其应用

摘要

本发明公开了一种山羊MSTN基因定点修饰系统及其应用方法，所述山羊MSTN基因定点修饰系统，即能够有效的识别、修饰山羊MSTN基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；本发明提供的转录激活样效应因子核酸酶TALENs由分别能够特异识别所述识别模块TALMEX-1F和TALMEX-1R的核酸酶TALEN-R和TALEN-L组成；所述核酸酶TALEN-L为SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示核苷酸序列编码的蛋白质，所述核酸酶TALEN-R为SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示核苷酸序列编码的蛋白质。本发明还公开了使用上述敲除系统对山羊细胞MSTN基因进行靶向修饰，获得突变细胞系的方法。本发明对于在山羊上对MSTN基因进行敲除或改造以获得优质瘦肉率的新品种及MSTN基因调控机理研究具有重大应用价值。

主权项

一种山羊MSTN基因定点修饰系统，其特征在于有效的基因定点修饰系统为剪切山羊MSTN基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；所述山羊MSTN基因靶序列如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，23‑40位核苷酸为识别模块TALMEX‑1F，与57‑74位核苷酸的互补序列为识别模块TALMEX‑1R，41‑56位核苷酸为间隔序列；所述的转录激活样效应因子核酸酶TALENs由识别所述识别模块TALMEX‑1F的核酸酶TALEN‑L和识别所述识别模块TALMEX‑1R的核酸酶TALEN‑R组成；所述核酸酶TALEN‑L，由TALMEX‑1F识别结构域TALE‑L与经过人工改造的DNA切割蛋白Fok‑L融合而成；所述核酸酶TALEN‑R，由TALMEX‑1R识别结构域TALE‑R与经过人工改造的DNA切割蛋白Fok‑R融合而成；所述识别结构域TALE‑L为SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示229‑2022位核苷酸编码的蛋白质；所述DNA切割蛋白Fok‑L为SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示2023‑2814位核苷酸编码的蛋白质；所述识别结构域TALE‑R为SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示229‑2022位核苷酸编码的蛋白质；所述DNA切割蛋白Fok‑R为SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示2023‑2808位核苷酸编码的蛋白质。