[发明专利]一种活动精子DNA的拉曼光谱的快速测量方法

摘要

本发明涉及一种活动精子DNA的基于拉曼光谱快速测量方法。本发明采用的技术方案是：试管收集精液样品，室温环境下精液自然液化；吸取已液化精液加入到含有密度梯度离心液离心管中，离心后吸弃上层精浆，而后再加入PBS缓冲液再次离心洗涤，吸弃上清，加入PBS缓冲液制成精子悬液，孵育；将金属底板粘贴在培养皿上，加入PBS缓冲液，吸取孵育后的精子悬液浸入培养皿中，精子游出并接触金属底板；设置光谱测量范围、积分时间、激发光波长，获得精子头部拉曼光谱数据。本发明利用细管玻璃吸管操作，可使从吸管尖头部分游出的活动精子吸附于金属底板，通过测量头部吸附于金属底板的精子评估精子DNA损伤情况。

主权项

一种活动精子DNA的拉曼光谱的快速测量方法，其特征是：（1）精液液化无菌试管收集精液样品，室温环境下静置20分钟使精液自然液化；（2）精液中活动精子的分离与准备利用移液枪吸取已液化精液，加入到含有密度梯度离心液的离心管中，1000g离心10分钟，吸弃上层精浆，保留离心管底部的精子。而后再加入PBS缓冲液重悬，再次离心洗涤，吸弃上清，然后加入PBS缓冲液重悬制成精子悬液，置于孵育箱中孵育；（3）活动精子的“固定”处理首先将尺寸为2×4cm的金属底板粘贴在培养皿上，往培养皿内加入PBS缓冲液，利用头部细长的玻璃毛细管吸取少量孵育后的精子悬液，然后将玻璃毛细管垂直浸入装有PBS缓冲液的培养皿中，玻璃毛细管细长的头部距离金属底板2～3mm，静置3分钟，精子将以头部往下的方式游出，并接触金属底板，形成头部“固定”尾部剧烈摇摆的吸附状态；（4）精子头部拉曼光谱的测量设置600～1800cm^‑1的光谱测量范围，利用显微镜普通观察模式下，将吸附于金属底板上的精子头部移动到视野中心，设置积分时间为30秒，选择785nm的激发光波长，获得精子头部拉曼光谱数据。