[发明专利]用于剔除标记基因的融合蛋白及其应用有效
| 申请号： | 201410158270.5 | 申请日： | 2014-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN103992409B | 公开（公告）日： | 2017-08-25 |
| 发明（设计）人： | 李宁;孙照霖;康倩倩;李秋艳;赵蕊;孙永川 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12N15/873;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5‑Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5‑Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5‑Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 剔除 标记 基因 融合 蛋白 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种剔除转基因猪筛选标记基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)构建CPP5‑Cre原核表达载体；2)利用步骤1)表达载体进行CPP5‑Cre融合蛋白的表达及纯化；3)将步骤2)得到的CPP5‑Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞进行孵育共培养获得克隆；4)鉴定筛选标记基因剔除的阳性克隆；5)通过体细胞克隆获得F0代，筛选标记基因剔除的转基因猪个体；所述CPP5‑Cre融合蛋白包括细胞穿膜肽CPP5和位点特异重组酶Cre蛋白，所述细胞穿膜肽CPP5的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。
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