[发明专利]一种使用含有指示剂的酚胍盐裂解液提取核糖核酸的方法

摘要

本发明涉及一种使用含有指示剂的酚胍盐裂解液提取核糖核酸的方法，属于核酸纯化技术领域。首先向恰当保存的组织材料中加入添加新型指示剂的酚胍盐裂解液，之后用匀浆器将样本粉碎均匀，加入氯仿使液体充分混匀后，离心转移上清至新管中，加入异丙醇沉淀核糖核酸，之后用75%的乙醇洗涤沉淀，最后用无核糖核酸酶的水溶解核糖核酸。本发明方法可用于提取动物、植物组织、细胞、血液、细菌以及病毒的总RNA，提取的RNA纯度高，基因组残留少，完整性好，适用于下游多种分子生物学实验。

主权项

一种使用含有指示剂的酚胍盐裂解液提取核糖核酸的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）向30‑50毫克动物组织或植物组织中加入1毫升含有指示剂的酚胍盐裂解液，用匀浆器匀浆样本，或液氮研磨，得到匀浆液；（2）将匀浆液在室温下放置5分钟，使得核酸与蛋白充分分离；（3）向步骤（2）的匀浆液中加入0.2毫升氯仿，颠倒混匀15秒，使氯仿与匀浆液充分混匀，室温下放置3分钟，进行离心，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分离的温度为4摄氏度，离心时间为15分钟，使水相与有机相彻底分离；（4）经步骤（3）离心后的溶液分为三层，上层为含有核糖核酸（RNA）的无色水相，中间层为含有脱氧核糖核酸（DNA）的白色界相，下层为含有蛋白质的红色有机相，将上层含有核糖核酸的无色水相转移至试管中；（5）在步骤（4）的试管中加入0.5毫升异丙醇沉淀核糖核酸（RNA），室温下保持10分钟，进行离心，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分离的温度为4摄氏度，离心时间为10分钟；（6）将步骤（5）离心后的上清液弃掉，保留核糖核酸（RNA）沉淀，向核糖核酸沉淀中加入1毫升75%乙醇洗涤，进行离心，离心分离的转速为8000转/分钟，离心分离的温度为4摄氏度，离心时间为5分钟；（7）弃掉步骤（6）的上清液，加入去核糖核酸酶（RNase‑free）的水，用移液枪反复吹打几次，溶解核糖核酸（RNA）。