[发明专利]一种适用于嗜热微生物遗传改造的基因元件及其载体和应用

摘要

本发明涉及分子生物学，具体的说是一种适用于嗜热微生物遗传改造的基因元件及其载体和应用。元件为嗜热II型内含子元件TeI3c‑4c，其由序列表SEQ ID NO.1和2中核酸序列所示。利用所述嗜热微生物遗传改造的基因元件打靶载体应用于嗜热微生物中，进而使嗜热微生物基因靶向失活。本发明利用Thermotargetron应用于嗜热微生物的基于II型内含子的靶向基因失活工具。具有基因失活效率高、可轻松改变靶位点（打靶载体构建周期短）、宿主范围广（可用于革兰氏阳性、阴性细菌中）、无需营养缺陷筛选标记、对转化效率要求低、可对较短基因序列进行失活（100‑200bp）低等优点。

主权项

1.打靶载体在嗜热微生物遗传改造的应用，其特征在于：将嗜热微生物遗传改造的基因元件打靶载体应用于嗜热微生物中，与嗜热微生物的识别位点结合，进而使嗜热微生物基因靶向失活；所述载体为具有嗜热微生物遗传改造的基因元件打靶载体；该载体以热纤梭菌穿梭质粒pHK为基础骨架，其含有复制起始位点、耐热复制蛋白repB、多克隆位点、嗜热II型内含子元件TeI3c‑4c和启动子元件；其中，嗜热II型内含子元件TeI3c‑4c为序列表SEQ ID NO.1和2中核酸序列所示；启动子源于嗜热微生物启动子；所述识别位点具有17个碱基WAAnnnnnnnnnnnnnn特征，其中W= A或T，N=A, T, G, C，确保能够被TeI3c‑4c正确识别；且TeI3c‑4c II型内含子元件EBS1, EBS2, EBS3与靶序列IBS1, IBS2, IBS3满足Watson‑Crick碱基互补配对原则，确保能被RNA正确识别。