[发明专利]结核分枝杆菌快速诊断试剂盒

摘要

本发明涉及一种结核分枝杆菌快速诊断试剂盒，属于医学检测试剂盒领域。反应体系组成，10×PCR缓冲液2μl，10mmol/L dNTP 1μl，Taq DNA聚合酶0.5μl，Mg2+ 0.5μl，5%甘油2μl，IS6110 0.2μl，Rv3881c 1μl，双蒸水10.8μl。本发明在常规PCR技术的基础之上，运用多重PCR技术，即在同一反应中加入2对引物并分别扩增，得到结核分枝杆菌不同的特异性DNA片段。此技术既保留了常规PCR的特异性和敏感性，又减少了操作步骤和试剂用量。因此多重PCR技术在微生物检测中更适用于临床，拥有更好的发展前景。

主权项

一种结核分枝杆菌快速诊断试剂盒，其特征在于包括下列反应体系，适合样本2μl：    10×PCR缓冲液        2μl 10mmol/L dNTP       1μl  Taq DNA聚合酶      0.5μl Mg2+               0.5μl 5%甘油              2μl IS6110             0.2μl Rv3881c             1μl双蒸水            10.8μl；所述IS6110（genebank ID: 885372，Location：NC_000962.3）是含有1361bp的核苷酸和28bp的反向末端重复序列，属于插入序列IS3 家族的一个成员， 引物F1 CGTCGCTAGTGCATTGTCATAG； R1 TACTACGACCACTCAACCGGGAG ；         扩增序列长度621bp   所述Rv3881c（genebank ID 886214，Location： NC_000962.3）是EspB蛋白的编码基因，EspB在结核分枝杆菌中分子量为55 kDa，分泌出来后其C端被切除，分子量变为48 kDa； 引物F2 CCTGCTGAGAACCCTTGGACT；           R2 GCTGGCGCTGGTGACATT；      扩增序列长度139bp。