[发明专利]HIV抗体及HIV-1p24抗原双标记时间分辨荧光免疫分析方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种HIV抗体及HIV-1p24抗原双标记时间分辨荧光免疫分析方法及试剂盒。该分析方法主要包括：制备同时包被有HIV重组抗原和HIV-1p24单克隆抗体的固相载体；制备生物素标记的HIV-1p24单克隆抗体；制备镧系元素1标记的HIV重组抗原；制备镧系元素2标记的链霉亲和素；在抗原和抗体固相载体中，加入含有HIV标准抗体和HIV p24标准抗原的校准品或待测样品，加入生物素标记的HIV-1p24抗体，孵育、洗涤后，加入镧系元素1标记的HIV抗原和镧系元素2标记的链霉亲和素，再次孵育、洗涤后，加入增强液进行荧光检测。本发明的分析方法解决了现有HIV抗原抗体联合检测中抗体与抗原不能区分的难点，实现了同时定量检测HIV抗体和HIV-1p24抗原，缩短了HIV检测窗口期。

主权项

一种HIV抗体及HIV‑1p24抗原双标记时间分辨荧光免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：①制备抗原和抗体固相载体：将HIV抗原和HIV‑1p24单克隆抗体用包被缓冲液稀释后作为包被液，包被固相载体，用封闭液封闭，形成抗原和抗体固相载体；②制备生物素标记抗体：用常规方法对HIV‑1p24单克隆抗体进行生物素标记，形成生物素标记抗体；③制备镧系元素1标记的HIV抗原：参照镧系元素离子标记试剂盒说明书，用镧系元素1对HIV抗原进行标记，制备镧系元素1标记的HIV抗原；④制备镧系元素2标记的链霉亲和素：参照镧系元素离子标记试剂盒说明书，用镧系元素2对链霉亲和素进行标记，制备镧系元素2标记的链霉亲和素；其中，所述镧系元素1和镧系元素2是不同的镧系元素；⑤测定方法：在步骤①制得的抗原和抗体固相载体中，加入含有HIV标准抗体和HIV‑1p24标准抗原的校准品或待测样品，加入步骤②制备的生物素标记抗体，经孵育、洗涤所述固相载体后，加入步骤③制备的镧系元素1标记的HIV抗原和步骤④制备镧系元素2标记的链霉亲和素，再次孵育、洗涤所述固相载体后，加入增强液进行荧光检测；其中，所述HIV标准抗体中不含HIV‑1p24抗体。