[发明专利]一种核酸提取磁珠的制备方法及应用

摘要

本发明公开一种核酸提取磁珠的制备方法，是将磁性纳米Fe₃O₄颗粒的表面包被一层硅羟基再分散到万分之二的NaN₃水溶液中；制得的硅基磁珠为核壳结构，包括Fe₃O₄纳米颗粒内核，SiO₂外壳层，SiO₂外壳层包覆在多个Fe₃O₄纳米颗粒外表面；硅基磁珠经超声分散处理1h后，用纳米激光粒度仪测得其二次粒径为400nm~1μm，饱和磁化强度为43.0～74.5emu/g；制得的硅基磁珠应用于新鲜动物组织、动物组织石蜡切片、植物叶片、种子、全血、血清游离、毛发、指甲、烟蒂、唾液、细菌或病毒等生物检材中的核酸提取及纯化。本发明的工艺流程简单，操作简便，原料成本低，适宜于工业化大批量生产。

主权项

一种核酸提取磁珠的制备方法，其特征是：其包括以下步骤：S1、Fe₃O₄纳米颗粒的制备分别配制浓度为0.1～1mol/L的Fe³⁺和Fe²⁺盐溶液，按Fe³⁺与Fe²⁺物质的量的比为1.5～2.0混合；上述混合液搅拌均匀后，加入0.15mol/L的聚乙二醇‑8000水溶液，聚乙二醇‑8000体积为Fe盐溶液总体积的1/10~1/5，通入氩气除氧30 min，调整反应体系温度60～70℃，再向混合液中滴加质量浓度为25％氨水至体系PH值为10～11，在温度为70～80℃条件下反应3～6h，冷却至室温后，磁分离出黑色沉淀，依次用质量浓度为1％氨水、5%NaCl及去离子水反复洗涤沉淀物数次至洗涤液为中性，‑10～‑20℃冷冻干燥24～48h，得到超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒；其中磁性纳米Fe₃O₄粒子颗粒分散到超纯水中经超声分散处理1h后，用纳米激光粒度仪测得其二次粒径为100～300nm，饱和磁化强度较高为57.4～79.4 emu/g；S2、纳米硅基磁珠的制备将步骤S1中所得的超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒称取2～500g分散到0.1～3L无水乙醇中超声波处理30～60min后，加入20～1000ml浓度为10～50g/L的分散剂，搅拌均匀后，向混合液中加入质量浓度为25％氨水至体系PH值为10，再滴加0.25～500ml体积比为1:1的正硅酸四乙酯与乙醇混合溶液，控制滴加速度为0.1～0.5ml/min，体系温度为30～50℃，滴加完毕后反应3～5h，磁分离出表面硅基修饰的Fe₃O₄纳米颗粒，用去离子水反复洗涤数次至洗涤液PH值为6～7，超声分散15～30min，分散在万分之二NaN₃水中，即得到硅基包被磁珠。