[发明专利]一种新型造血干细胞检测试剂制备方法和应用在审
| 申请号： | 201410017886.0 | 申请日： | 2014-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN104745668A | 公开（公告）日： | 2015-07-01 |
| 发明（设计）人： | 李春艳 | 申请（专利权）人： | 上海吉泉生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201318 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种新型造血干细胞检测试剂制备方法和应用。所述制备方法，包括溶解甲基纤维素，依次按照比例加入IMDM培养基、胎牛血清、经过离子交换树脂处理的牛血清白蛋白、2-ME、重组人干细胞生长因子、重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素3。本发明获得的造血干细胞检测试剂可以检测人和小鼠骨髓、外周血、脐带血中的造血干细胞数量，富有应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 新型 造血 干细胞 检测 试剂 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种新型的造血干细胞检测试剂，其特征在于，是由下述步骤组成：1.称取甲基纤维素11克，加入煮沸的250mL去离子水中，用加热磁力搅拌器不断的搅拌，使之充分混匀，继续煮沸15?30分钟后，将瓶取下，于室温中冷却至37℃。2.于步骤(1)中加入IMDM(2×)250mL，并反复振荡200次，使之充分混匀后置4℃冰箱中，2小时后，置?20℃冰箱冻结，24小时后取出，于室温中融化，分装，置4℃冰箱中保存。3.称取BSA100g，加入去离子水440mL，混匀，4℃过夜，次日补充去离子水至500mL，加入AG501(D)20?50筛孔离子交换树脂15g，4℃下轻轻搅拌直到树脂完全变色，再加离子交换树脂15g，4℃下搅拌过夜。如果部分树脂保留蓝色，表BSA完全去离子，倘若不见蓝色树脂，需再加离子交换树脂15g，继续搅拌过夜，过滤去除离子交换树脂，然后1000rpm／min，离心30分钟，测体积，再加等体积2×IMDM混匀，无菌过滤，分装10mL／管，?20℃冻存备用。4.在离心管中依次加入胎牛血清3mL，10％BSA1.5mL，100uL2?ME，100uL重组人干细胞生长因子，100uL重组人粒?巨噬细胞集落刺激因子，100uL重组人白细胞介素3，最后加入步骤(2)配置的甲基纤维素5.1mL，充分混匀，?20℃冻存，次日取出，于室温中融化，分装，4℃保存备用。
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