[发明专利]一种检测柯萨奇病毒A2、A5型的荧光定量试剂盒

摘要

本发明提供一种检测柯萨奇病毒A2、A5型的荧光定量试剂盒，由定量RT-PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、CVA2和CVA5标准品、CVA2和CVA5强阳性对照品、CVA2和CVA5弱阳性对照品、阴性对照品组成。本发明运用一步法实时荧光定量RT-PCR技术，采用CVA2、CVA5高度特异的引物和荧光标记探针，从粪便标本中同时检测出是否有CVA2、CVA5的存在，比单重荧光定量PCR方法更便捷迅速、节约成本。检测实时、准确定量，为临床提供早期诊断，为临床治疗方案的制定提供参考依据；可应用于柯萨奇病毒A2、A5型引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及手足口病的流行病学的研究。

主权项

一种检测柯萨奇病毒A2、A5型的荧光定量试剂盒，其特征在于，本试剂盒由定量RT‑PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、CVA2标准品、CVA5标准品、CVA2强阳性对照品、CVA5强阳性对照品、CVA2弱阳性对照品、CVA5弱阳性对照品、阴性对照品组成，其中定量RT‑PCR反应液包含PCR反应缓冲液、氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐热Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，引物探针混合液包含CVA2、CVA5两组特异性引物和相应的CVA2、CVA5两种荧光标记的特异性探针，阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，CVA2、CVA5强阳性对照品和CVA2、CVA5弱阳性对照品为包含CVA2、CVA5的保守区基因序列的阳性质粒样品；CVA2、CVA5两组特异性引物和CVA2、CVA5两种荧光标记的特异性探针序列如下：上游引物CVA2‑F: 5’‑ AGTCGRCCAGTGTCTCAYTCA‑3’，下游引物CVA2‑R：5’‑TACACGCCCRGTCTCAATGG‑3’，特异性探针CVA2‑P: 5’‑FAM‑ AACAGCTGCWAACACCCAGGTRAGCC‑BHQ1‑3’，上游引物CVA5‑F: 5’‑ AAGCGGCGGAGACAGGAG‑3’，下游引物CVA5‑R: 5’‑ CCATGCCTGTTGACCACACA‑3’，特异性探针CVA5‑P: 5’‑HEX‑ CAAAYGCCACCGAYGARAGCATGA‑BHQ1‑3’。