[发明专利]优化episomal技术建立人ips的方法有效
| 申请号： | 201410008523.0 | 申请日： | 2014-01-02 |
| 公开（公告）号： | CN103756970A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 程涛;李彦欣;顾海慧;刘淑萍;许静;袁卫平;张孝兵 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人： | 韩敏 |
| 地址： | 300020 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种优化episomal技术建立人ips的方法，本发明是建立在无插入的episomal技术上，通过对reprogramming培养中的氧含量降低为5%，外周血培养液为红系培养液，单核细胞在体外培养8天电转，诱导后建系时换为无feeder的E8培养液，使iPS效率又有显著提高，并且iPS细胞系的建立和扩增效率也有明显提高。为建立人iPS细胞库的提供可行性。 | ||
| 搜索关键词： | 优化 episomal 技术 建立 ips 方法 | ||
【主权项】：
一种优化episomal技术建立人ips的方法，其特征在于：包括如下步骤：利用ficoll梯度离心技术分离外周血单核细胞，利用红系培养体系，即使用红系诱导培养基培养单核细胞，体外培养8天，利用Amaxa细胞核转染仪电转episomal的pEV SFFV‑OS(OS),pEV SFFV‑MK(MK),pEV SFFV‑B(B)三个质粒，放在feeder上，电转后到利用机械手段建立iPS细胞系之前在低氧条件下培养；低氧条件：5%O2，5%CO2，90%N2的混合气体，利用红系诱导培养基培养1天，再应用红系诱导培养基和hESC培养基（质量比1:1）培养，而后逐渐换成人ES培养基，培养7天换为CM（条件培养基：培养新鲜feeder一天的ES培养液）,培养12‑15天看到人iPS细胞克隆，20天左右将每个克隆挑出培养在24孔板中，利用E8培养液培养,传代10代后检测ES特性，合格的为iPS细胞系。
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