[发明专利]无动物源的不含酒精的疫苗组合物及其制备方法

摘要

公开了疫苗组合物和用于在无动物成分的培养基中培养包含毒性荚膜多糖的致病菌、分离、纯化多糖和多糖‑蛋白质缀合物的方法。荚膜多糖的纯化可以采用或可以不采用酒精用于制备免疫原性制剂。从本发明的方法获得的免疫原被配制并且不包含动物源和酒精赋形剂的任何来源。还公开了用于流感嗜血杆菌(Haemophilus Influenza)的细菌荚膜多糖的分离、纯化和缀合的方法。用于纯化、内毒素去除和免疫缀合物形成的新颖方法还被用来产生新颖组合物，该组合物负责激发针对Hib的感染的免疫原性和其预防以及其治疗。

主权项

1.由细菌培养物纯化荚膜多糖、去除荚膜多糖的内毒素和回收荚膜多糖的方法，所述方法不涉及酒精和任何动物成分，包括以下步骤：a.在冷却条件下使用100kD截止膜以8000转每分钟(RPM)离心所述细菌培养物，并且收集上清液；b.通过连续模式离心或批式离心使所述上清液浓缩至其原始尺寸的四分之一；c.将10％十六烷基三甲基溴化铵添加至步骤b的浓缩的上清液，并且在搅拌条件下室温将其孵育3小时；d.以3L/分钟的流速将步骤c的上清液加样到深度过滤器上，直到十六烷基三甲基溴化铵沉淀物被收集，并且在室温下使用注射用水(WFI)清洗所述沉淀物，直到滤液的电导率为0；e.溶解步骤d的沉淀物，并且使用0.5M NaCl洗脱以提供荚膜多糖洗脱液；f.添加步骤e的所述荚膜多糖洗脱液，用WFI稀释以得到0.2M NaCl浓度来收集所述上清液，接着将所述上清液相对于10mM pH 7的磷酸缓冲盐水(PBS)渗滤以获得部分纯化的荚膜多糖；g.使用Triton X114相分离技术去除步骤f的所述部分纯化的荚膜多糖的内毒素，在静止条件下在30±3℃下孵育反应样品，收集上层，并且加样到离子交换XAD基质上以去除残留的Triton X114；h.使用20mM pH 7的PBS缓冲液渗滤步骤g的荚膜多糖洗脱液；和i.使用0.22μm囊式过滤器无菌过滤步骤i的荚膜多糖，以获得经纯化的荚膜多糖。