[发明专利]大肠杆菌乙酰乳酸合酶的制备及保存方法

摘要

本发明提供一种制备纯度好、活性高且能够稳定存在的AHAS的方法。该方法包括以下步骤：根据大肠杆菌AHAS催化亚基的基因序列设计上下游引物，设计的上游引物带有Xho I酶切位点，下游引物带有BamHⅠ酶切位点，以大肠杆菌BL21菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增技术得到目的片断ahas；将目的片断ahas连接到表达载体PGEX-AT-1上，得到重组质粒PGEX-4T-1-ahas，并在原核表达系统中实现诱导表达；用谷胱甘肽巯基转移酶（GST）修饰的琼脂糖凝胶树脂对所表达的酶进行纯化，从而获得活性良好的乙酰乳酸合酶。

主权项

一种大肠杆菌乙酰乳酸合酶（AHAS）的制备方法，包括以下步骤：根据大肠杆菌AHAS催化亚基的基因序列设计上下游引物，设计的上游引物带有Xho I酶切位点，下游引物带有BamHⅠ酶切位点，具体如下：上游引物：5′‑GCAGGATCCATGGCAAGTTCGGGCACA‑3′下游引物：5′‑GATCTCGAGTTATTCCCCCACCATTTC‑3′；以大肠杆菌BL21菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增技术得到目的片断ahas；将目的片断ahas连接到表达载体PGEX‑AT‑1上，得到重组质粒PGEX‑4T‑1‑ahas，并在原核表达系统中实现诱导表达；用谷胱甘肽巯基转移酶（GST）修饰的琼脂糖凝胶树脂对所表达的酶进行纯化，从而获得活性良好的乙酰乳酸合酶。