[发明专利]一种检测miRNA的方法

摘要

本发明公开了一种检测miRNAs的方法，其包括：（1）合成DNA四面体探针；（2）将所述的DNA四面体探针的三个顶点连接到电化学装置的工作电极表面，即得带有捕获探针的工作电极；（3）向反应体系中加入待测目标miRNAs、信号探针和辅助链进行杂交反应形成复合体I，再将工作电极浸入反应体系中进行杂交反应形成复合体II；（4）将复合体II与能催化氧化还原反应的酶进行反应；（5）加入所述的酶催化反应的底物，进行电化学检测分析。本发明无需对目标miRNAs进行标记，也无需对miRNAs进行预先PCR扩增，即可直接采用本发明的方法进行检测，操作简单，从而大大降低了实验成本，提高了实验效率。

主权项

一种基于DNA三维纳米结构自支撑界面检测miRNAs的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）通过DNA纳米自组装技术一步法合成DNA四面体探针；（2）将步骤（1）所述的DNA四面体探针的三个顶点通过自组装连接到电化学装置的工作电极表面，另一个顶点延伸出一段游离的miRNAs识别序列，即得带有捕获探针的工作电极；（3）向反应体系中加入待测目标miRNAs、信号探针和辅助链进行杂交反应形成复合体I，再将步骤（2）所述的带有捕获探针的工作电极浸入反应体系中，使捕获探针与复合体I进行杂交反应，在工作电极表面形成复合体II，所述信号探针的游离端修饰有基团X，所述辅助链的一端具有与信号探针相互补结合的序列，所述辅助链的另一端具有与捕获探针相互补结合的序列，所述辅助链的中间区段具有与待测目标miRNAs相互补结合的序列；（4）将步骤（3）所得的复合体II与能催化氧化还原反应的酶进行反应，使所述酶连接于信号探针的游离端，所述酶修饰有能与步骤（3）中所述的基团X特异性结合的基团Y；（5）加入步骤（4）所述的酶催化反应的底物，进行电化学检测分析。