[发明专利]一种弄岗唇柱苣苔的离体保存方法

摘要

本发明提供一种弄岗唇柱苣苔的离体保存方法，其包括以下步骤：选取弄岗唇柱苣苔无菌苗材料；将试验材料接种到不同的培养基上，将试验材料接种到添加不同抑制剂的培养基中，将试验材料放置在四种光照强度下，总结出弄岗唇柱苣苔离体保存的最佳条件。采用本发明方法为濒危物种弄岗唇柱苣苔种质资源保存提供新技术支持及可持续利用的有效途径。

主权项

一种弄岗唇柱苣苔的离体保存方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）选取广西壮族自治区药用植物园离体保存库中弄岗唇柱苣苔试管苗在繁殖培养基上培养20d获得的丛生芽作为试验材料；（2）将步骤（1）得到的1‑2cm弄岗唇柱苣苔无菌丛生芽接种到试验设计MS、1/2MS、1/4MS三种培养基上，接种10瓶，每瓶5株单芽；培养基中25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，培养温度25±1 ℃，光强1600 lx，光照12‑14 h/d；（3）将步骤（1）得到的1‑2cm弄岗唇柱苣苔无菌丛生芽接种到添加不同浓度矮壮素、脱落酸、多效唑的培养基上，接种10瓶，每瓶5株单芽；培养基中25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，培养温度25±1 ℃，光强1600 lx，光照12‑14 h/d；（4）将步骤（1）得到的1‑2cm弄岗唇柱苣苔无菌丛生芽接种到以蔗糖、甘露醇、山梨醇的3个水平设计正交试验培养基，接种10瓶，每瓶5株单芽；培养基中25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，培养温度25±1 ℃，光强1600 lx，光照12‑14 h/d；    （5）将步骤（1）得到的1‑2cm弄岗唇柱苣苔无菌丛生芽接种到繁殖培养基，设计0、800 lx，1600 lx，2400 lx四种光照强度，每种光强接种10瓶，每瓶5株单芽；培养基中25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，培养温度25±1 ℃，光照12‑14 h/d；（6）离体保存的弄岗唇柱苣苔试管苗的生长恢复情况考察：将生长健壮的弄岗唇柱苣苔试管苗单芽切下接种到最佳保存培养基上保存300d后，存活的弄岗唇柱苣苔苣苔试管苗接种到MS+上，每30d继代1次，继代3次后，以株高、形态、叶长、叶宽、芽增殖倍数、平均生长率、单株生根率为指标考察弄岗唇柱苣苔试管苗的恢复情况。