[发明专利]从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法

摘要

本发明涉及紫杉醇的制备方法，尤其是涉及从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法，其包括将细胞培养液过滤、经大孔树脂吸附富集，得粗提物、经常压碱性氧化铝柱层析、经过C18反相高效制备液相分离，分部收集组分、离心获取沉淀、将沉淀冷冻干燥后得高纯度紫杉醇单体。本发明选用紫杉醇高产细胞系培养液作为原材料，与红豆杉枝叶、树皮等提取相比，所含色素、脂质等杂志更少，相比于真菌和细菌发酵液，其所含紫杉醇更高，该材料方便提取；同时从红豆杉细胞培养液中直接用大孔树脂富集紫杉醇，省去大量有机溶剂使用，工艺简单，节约环保，回收率高，获得的紫杉醇纯度高。

主权项

从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法，其包括以下步骤：（1）将红豆杉细胞培养液进行固液分离，得到原液和细胞；然后将细胞破壁后过滤，得到滤液和滤渣；再将所述原液与滤液混合；（2）将上述混合液体通过非极性大孔树脂吸附层析柱富集，然后用蒸馏水冲洗，再用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，并将洗脱液中的乙醇蒸干；（3）向上述蒸干乙醇的洗脱液中加入萃取剂，进行两次液液萃取，收集有机溶剂层，低温真空干燥，得到大孔树脂柱富集紫杉醇粗品；（4）将上述粗品转载于用碱性氧化铝做填料的层析柱，用洗脱溶液进行洗脱，分部收集洗脱部分，并真空干燥，得到样品；（5）将上述样品通过C18 高效液相色谱柱纯化，然后用含甲醇溶液作流动相洗脱，分部收集紫杉醇洗脱部分，将收集的组分置于通风厨，挥发有机相，待出现结晶后转至4℃冰箱放置24h，离心收集一部分晶体，然后将上清液继续放置使结晶完全，离心收集另一部分晶体，再将收集的全部晶体冷冻干燥，得到高纯度紫杉醇单体。