[发明专利]一种阿维菌素和伊维菌素残留的检测方法

摘要

一种阿维菌素和伊维菌素残留的检测方法，属于阿维菌素和伊维菌素残留的检测方法领域。解决了传统液相荧光色谱法未根据不同的SPE柱及阿维菌素和伊维菌素的化学结构特点选择合理的净化条件，造成净化效果不理想、回收率不稳等问题。本发明步骤如下以乙腈为提取剂，将残留在鱼肉中的阿维菌素和伊维菌素提取出来，采用目标物吸附固相萃取模式，以中性氧化铝柱为固相萃取柱，正己烷上样、淋洗，甲醇洗脱，弃去全部正己烷流出液，仅收集甲醇洗脱液，实现鱼肉中残留阿维菌素和伊维菌素的富集和净化，明确了衍生温度和定溶溶剂及标准使用液和衍生物样品存放条件和测定时间，提高检测方法灵敏度、重复性和准确度，适合大批量样品检测。

主权项

一种阿维菌素和伊维菌素残留的检测方法，其特征是：步骤一、提取称取样品5.0g放置于规格为50ml的离心管中，向该离心管中加入10g在650°温度下烘干4小时的无水Na2SO4，再向该离心管中加入15ml乙腈，涡旋振荡两分钟，在4000r/min的条件下于离心机中离心操作三分钟，将该离心管中的上清液转移至规格为50ml的茄形瓶中，向该离心管中的残渣里加入10ml乙腈，按照上述方法继续对该离心管中的残渣进行提取，合并两次的提取液，在50℃～60℃条件下于旋蒸仪中，逐步开大旋蒸仪的真空度并将压力保持在‑0.08Mpa以下旋蒸至干，向该旋蒸至干的茄型瓶中加入2mL正己烷涡旋溶解，得到正己烷提取液，备用；步骤二、固相萃取取中性氧化铝固相萃取柱AgilentBONDELUT‑AL‑N，规格为500mg/3ml，添加无水硫酸钠Na2SO4用于本步骤二的固相萃取操作，向该固相萃取小柱中加入2ml正己烷进行预洗，将步骤一中的正己烷提取液过柱，保持流速在10滴/分钟～15滴/分钟，再用2mL正已烷清洗该茄形瓶并过柱，然后用1ml～2ml正己烷淋洗该固相萃取柱并吹干，弃去全部正己烷流出液，依次取2ml、2ml、1ml甲醇对该固相萃取小柱进行洗脱操作，收集全部甲醇洗脱液于另一干燥的茄形瓶中，在50℃～60℃条件下于旋蒸仪中减压即逐步开大旋蒸仪的真空度并将压力保持在‑0.08Mpa以下旋蒸至干，该旋蒸至干的茄形瓶备用；步骤三、样品溶液的衍生向步骤二中旋蒸至干的茄形瓶里加入100μL衍生化试剂，该衍生化试剂为乙腈与N‑甲基咪唑等比例混合，立即密闭并涡旋混匀，再加入150μL衍生化试剂，该衍生化试剂为乙腈与三氟乙酸酐按2:1比例混合，立即密闭并并涡旋混匀，于控温箱中25℃衍生化反应15分钟，取出后加入750μl乙腈，经过0.45μm滤膜过滤后注入HPLC色谱仪分析；其中衍生化试剂A液为乙腈与N‑甲基咪唑等比例混合，使用前制备，衍生化试剂B液为乙腈与三氟乙酸酐按2:1比例混合，使用前制备；步骤四、结果设定适宜的HPLC色谱仪荧光检测色谱条件，供分析用；将不同浓度的阿维菌素和伊维菌素标准衍生溶液上机测定，绘制标准曲线；将步骤三中制备的待测样品衍生溶液进行液相色谱分析，采用外标法定量，根据定量结果计算待测样品中阿维菌素和伊维菌素的含量。