[发明专利]一种牛细胞因子电化学无标记阻抗型免疫检测方法

摘要

一种牛细胞因子电化学无标记阻抗型免疫检测方法，属于电化学免疫分析技术领域。将纳米材料超声分散于壳聚糖溶液制备纳米材料/壳聚糖复合物，利用该纳米复合物修饰玻碳电极固定牛细胞因子抗体，获得新颖的牛细胞因子免疫传感器，然后将其应用于牛细胞因子的电化学无标记阻抗免疫检测。该检测方法无需标记、简单、快速、成本低、灵敏度高、重现性和稳定性好，可以用于牛结核病的早期诊断及牛细胞免疫机理的研究。

主权项

一种牛细胞因子电化学无标记阻抗型免疫检测方法，其特征在于包括以下步骤；1）将纳米材料超声分散在壳聚糖醋酸溶液中，形成纳米材料和壳聚糖的复合物，然后再混入牛细胞因子抗体，形成纳米材料/壳聚糖/牛细胞因子抗体混合液；所述纳米材料为还原石墨烯、介孔二氧化硅纳米颗粒或棒状二氧化钛；2）将纳米材料/壳聚糖/牛细胞因子抗体混合液滴涂于洁净的玻碳电极表面，晾干后，再经牛血清蛋白封闭活性位点后，制得具有牛细胞因子免疫传感器的玻碳电极材料；3）将具有牛细胞因子免疫传感器的玻碳电极材料置于含有37℃的牛细胞因子样品体系中，温育40分钟后以蒸溜水冲洗，制得牛细胞因子免疫传感器；4）将制得的牛细胞因子免疫传感器置于已知的含有牛细胞因子的缓冲液中，在37℃条件下温育40 min后，取出温育后的牛细胞因子免疫传感器，以蒸馏水冲洗；5）以蒸馏水冲洗后的牛细胞因子免疫传感器为工作电极、饱和甘汞电极作为辅助电极、铂片电极作为对电极，进行交流阻抗实验，制得同一种牛细胞因子和不同浓度的该牛细胞因子的交流阻抗谱图； 6）从各交流阻抗谱图中取得各谱图的直径，然后制成牛细胞因子浓度的对数值与阻抗前后相对变化值的线性关系图；7）将牛细胞因子免疫传感器置于待测样品的缓冲液中，在37℃条件下温育40 min后，取出温育后的牛细胞因子免疫传感器，以蒸馏水冲洗；然后以与步骤5）相同的条件进行交流阻抗实验，取得牛细胞因子的交流阻抗谱图，然后读取谱图的直径值；8）在步骤6）取得的线性关系图中查找步骤7）取得的谱图的直径值所对应的值，即待测样品的牛细胞因子浓度的对数值。