[发明专利]一种阿扎那韦中间体的生物制备方法

摘要

本发明涉及阿扎那韦中间体的生物制备方法，其以(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯为底物，实施如下：在反应器中加入底物、助溶剂及葡萄糖，搅拌均匀，称取酮还原酶酶粉，葡萄糖脱氢酶和辅因子溶于pH8～9的水相缓冲溶液中，将所得混合溶液加入反应器中，搅拌，控制温度32℃～34℃，开始反应，反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.05～0.2g/ml，酶、辅因子、葡萄糖、底物三者的投料质量比为0.02～0.03∶0.001～0.005∶0.8～1.2∶1。与已有方法相比，本发明实现了高反应效率和更加绿色、温和的生物转化过程，具有重要的应用价值。

主权项

一种阿扎那韦中间体的生物制备方法，所述阿扎那韦中间体为叔丁基((2S,3R)‑4‑氯‑3‑羟基‑1‑苯丁基‑2‑基)氨基甲酸酯，所述方法以(S)‑叔丁基(4‑氯‑3‑羰基‑1‑苯丁基‑2‑基)氨基甲酸酯为底物，使该底物在酮还原酶作用下发生不对称还原反应生成阿扎那韦中间体，并利用葡萄糖脱氢酶与葡萄糖进行辅酶循环，其特征在于，所述的方法实施如下：在反应器中加入所述底物、助溶剂以及葡萄糖搅拌均匀，另称取酮还原酶酶粉，葡萄糖脱氢酶和辅因子溶于pH8～9的水相缓冲溶液中，并将所得混合溶液加入至反应器中，搅拌，控制温度在32℃～34℃之间，开始反应，HPLC检测反应转化率，至转化率大于等于96%时，结束反应，其中反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.05～0.2g/ml，酶、辅因子、葡萄糖、底物三者的投料质量比为0.02～0.03:0.001～0.005:0.8～1.2:1，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的助溶剂为乙腈或甲苯或二者的组合。