[发明专利]一种调控铁皮石斛悬浮细胞多糖含量增加的方法

摘要

本发明研究了一种调控铁皮石斛悬浮细胞多糖含量增加的方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养、稀土调控铁皮石斛试管苗多糖的含量等步骤，本发明方法所制备的铁皮石斛悬浮细胞生长好，代谢物质多糖的含量高。本发明方法利用稀土对铁皮石斛悬浮细胞进行有目的的调控，可以在短期内获得大量多糖含量高的铁皮石斛细胞，获得大量的制药原料，并能有效降低生产成本，益于进行工业化生产。

主权项

一种调控铁皮石斛悬浮细胞多糖含量增加的方法，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：野外生长的铁皮石斛叶片，在MS培养基上，附加激素NAA 1mg/L，IBA 2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，诱导愈伤组织，诱导30天，继代4‑5次，继代周期20天，取继代后的嫩绿松散的愈伤组织，加入White液体培养基中，附加激素TDZ0.1‑0.5mg/l+IAA0.3‑1.0mg/l，进行铁皮石斛悬浮细胞培养，培养30天后，在培养基中加入1‑3mg/l稀土，进行悬浮细胞和多糖含量的调控，取样后采用水提法提取铁皮石斛多糖含量，提取时间为7.5 h，料液比为1:20，pH为8.5，使用树脂吸附法对多糖进行纯化，D301R树脂对铁皮石斛多糖吸附量大，氯化钠洗脱效果最好，使用苯酚‑硫酸法对纯化后的多糖进行检测。