[发明专利]核桃粕抗氧化肽及其制备方法

摘要

本发明涉及核桃粕抗氧化肽及其制备方法，本发明利用核桃粕蛋白，通过酶法水解，得到青养蛋白酶解液，再利用凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱对其进行分离纯化得到十四种新的抗氧化肽产品，并测定其氨基酸序列。本发明所制得的抗氧化肽具有很强的抗氧化作用，氧自由基吸收能力都约为粗肽的4倍，而且肽具有分子量小、可被人体直接吸收的特点，因此可以广泛应用于食品、保健品及化妆品等领域。

主权项

1.核桃粕抗氧化肽的制备方法，其特征在于该方法步骤如下：（1）核桃粕蛋白酶解物的制备：将核桃粕与水按质量比1:8～1:10混合，加入占核桃粕蛋白质量1%-2%的胰酶，在50-55℃酶解18-22h；沸水中10-30min灭酶，离心，取上清液，抽滤，得到核桃粕蛋白酶解液,冻干得到核桃粕蛋白多肽粉末；（2）抗氧化肽的分离纯化：将核桃粕蛋白酶解液冻干后，用1.6×100cm的SephadexG-15凝胶柱进行分离纯化，用去离子水以0.5～2.0ml/min的流速进行洗脱，检测波长为214nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分D，冷冻干燥得粉末D；（3）将粉末D溶于水后，用反相高效液相色谱进行纯化，分别得到活性组分D2和活性组分D3，得到所述抗氧化肽；其中纯化条件为：色谱柱为XBridge^TMpreC₁₈柱(5μm,10×150mm;Waters,USA)，流动相为A相-B相，所述A相为已腈，所述B相为0.1%-0.2%V/V三氟乙酸水溶液，洗脱程序为：在0-4min内采用的流动相中A、B的体积百分比分别为5%和95%；在4-8min内采用的流动相中A、B的体积百分比分别为15%和85%；在8-12min内采用的流动相中A、B的体积百分比分别为15%和85%，在12-30min内采用的流动相中A、B的体积百分比分别为40%和60%，流速为1.5-4mL/min，检测波长为215nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的两个峰。