[发明专利]从血液中检测用于诊断脑卒中的microRNA的方法

摘要

本发明涉及从血液中检测用于诊断脑卒中的microRNA的方法。其包括：向由多种荧光编码微球组成的混合物中加入待测样品和多种核酸探针，进行杂交反应；向发生杂交反应后的混合物中加入多种单链降解酶，进行降解反应；向发生降解反应后的混合物中加入荧光标记的链霉亲和素进行结合反应；清洗发生结合反应后的微球；识别清洗后的微球的荧光编码，同时检测微球上的链霉亲和素的荧光强度；根据微球的荧光编码确定其检测的microRNA的种类；根据荧光强度，确定该微球上是否结合有相应类型的microRNA，从而确定待测样品中是否存在相应类型的microRNA。本发明省去了合成引物的步骤，使得检测省时又省力。

主权项

从血液中检测用于诊断脑卒中的microRNA的方法，其特征在于，包括下列步骤：向由多种荧光编码微球组成的混合物中加入待测样品和多种核酸探针，进行杂交反应；其中，所述荧光编码微球固定有第一核酸片段，并且所述荧光编码微球的荧光编码与该荧光编码微球上的所述第一核酸片段的序列为一一对应的关系；所述核酸探针为生物素与第二核酸片段的偶联物，并且所述第二核酸片段包括：与所述荧光编码微球上的所述第一核酸片段互补的第一子片段，以及与一种microRNA互补的第二子片段；所述第二子片段与所述第一核酸片段的序列不同；所述第二子片段分别与以下中的一种microRNA互补：hsa‑let‑7a‑5p，hsa‑let‑7c，hsa‑let‑7d‑5p，hsa‑let‑7f‑5p，hsa‑let‑7g‑5p，hsa‑let‑7i‑5p，hsa‑miR‑1182，hsa‑miR‑1225‑3p，hsa‑miR‑1225‑5p，hsa‑miR‑1228‑3p，hsa‑miR‑1234，hsa‑miR‑1238，hsa‑miR‑126‑3p，hsa‑miR‑126‑5p，hsa‑miR‑1260b，hsa‑miR‑1275，hsa‑miR‑128，hsa‑miR‑1280，hsa‑miR‑1304‑3p，hsa‑miR‑142‑3p，hsa‑miR‑146a‑5p，hsa‑miR‑148a‑3p，hsa‑miR‑148b‑3p，hsa‑miR‑151a‑3p，hsa‑miR‑151a‑5p，hsa‑miR‑151b，hsa‑miR‑152，hsa‑miR‑15a‑5p，hsa‑miR‑181a‑5p，hsa‑miR‑1825，hsa‑miR‑18a‑5p，hsa‑miR‑191‑3p，hsa‑miR‑197‑3p，hsa‑miR‑197‑5p，hsa‑miR‑199a‑3p，hsa‑miR‑199a‑5p，hsa‑miR‑21‑5p，hsa‑miR‑211‑3p，hsa‑miR‑221‑3p，hsa‑miR‑223‑3p，hsa‑miR‑2392，hsa‑miR‑23a‑3p，hsa‑miR‑23b‑3p， hsa‑miR‑26b‑5p，hsa‑miR‑27b‑3p，hsa‑miR‑30b‑5p，hsa‑miR‑3162‑3p，hsa‑miR‑3180‑5p，hsa‑miR‑3196，hsa‑miR‑326，hsa‑miR‑328，hsa‑miR‑331‑3p，hsa‑miR‑335‑5p，hsa‑miR‑340‑5p，hsa‑miR‑3676‑3p，hsa‑miR‑376a‑3p，hsa‑miR‑376c，hsa‑miR‑377‑3p，hsa‑miR‑382‑5p，hsa‑miR‑425‑3p，hsa‑miR‑4270，hsa‑miR‑4271，hsa‑miR‑4298，hsa‑miR‑4313，hsa‑miR‑4433‑5p，hsa‑miR‑4442，hsa‑miR‑4463，hsa‑miR‑4484，hsa‑miR‑4499，hsa‑miR‑4532，hsa‑miR‑4655‑3p，hsa‑miR‑4665‑3p，hsa‑miR‑4669，hsa‑miR‑4695‑5p，hsa‑miR‑4725‑5p，hsa‑miR‑4734，hsa‑miR‑4749‑3p，hsa‑miR‑4763‑3p，hsa‑miR‑4767，hsa‑miR‑4778‑5p，hsa‑miR‑4800‑5p，hsa‑miR‑483‑5p，hsa‑miR‑486‑3p，hsa‑miR‑494，hsa‑miR‑5195‑3p，hsa‑miR‑574‑3p，hsa‑miR‑590‑5p，hsa‑miR‑642b‑3p，hsa‑miR‑652‑3p，hsa‑miR‑652‑5p，hsa‑miR‑671‑5p，hsa‑miR‑936；向发生所述杂交反应后的混合物中加入多种单链降解酶，进行降解反应，使一种所述单链降解酶降解一种microRNA；向发生所述降解反应后的混合物中加入荧光标记的链霉亲和素进行结合反应；其中，所述链霉亲和素发出的荧光波长与所述荧光编码微球发出的荧光波长不同；清洗发生所述结合反应后的所述荧光编码微球；识别清洗后的所述荧光编码微球的荧光编码，同时检测所述荧光编码微球上的链霉亲和素的荧光强度；根据所述荧光编码微球的荧光编码确定其检测的microRNA的种类；根据所述荧光编码微球上的链霉亲和素的荧光强度，确定该荧光编码微球上是否结合有相应类型的microRNA，从而确定所述待测样品中是否存在相应类型的microRNA。