[发明专利]一种用于鉴别绵羊与山羊源性成分的基因探针

摘要

本发明提供的一种用于鉴别绵羊与山羊源性成分的基因探针，包括设计一对基因探针：绵羊源性探针5＇-CTGTAACCCACATTTGCCGAGACG-3′bp24；山羊源性探针 5’-TGATGAGATGTTTGATGGGG-3’bp20；探针位于细胞色素b基因,即Cytb上，所用的引物为：5′-AAAAAGCTTCCATCCAACATCTCAGCATGATGAAA-3′，5′-AAACTGCAGCCCCTCAGAATGATATTTGTCCTCA-3′，扩增片段：530-550bp；采用酚—氯仿法或试剂盒法，提取待检样品DNA；实施PCR扩增；设计点制芯片；杂交及清洗等。

主权项

一种用于鉴别绵羊与山羊源性成分的基因探针，其特征在于：分步实施;其 1  设计一对基因探针：绵羊源性探针 5＇‑CTGTAACCCACATTTGCCGAGACG‑3′bp 24；山羊源性探针  5’‑TGATGAGATGTTTGATGGGG‑3’bp 20；其2探针位于细胞色素b基因,即Cytb上，所用的引物为：5′‑AAAAAGCTTCCATCCAACATCTCAGCATGATGAAA‑3′，5′‑AAACTGCAGCCCCTCAGAATGATATTTGTCCTCA‑3′，扩增片段：530‑550bp；其 3 采用基因芯片法：1）采用酚—氯仿法或试剂盒法，提取待检样品DNA；2）PCR 扩增PCR 反应体系：10×PCR buffer 5 μL、Mg2+ 2.5 μL、dNTPs，即2.5mmol/L，4 μL、Cy5‑dCTP 0.5 μL、正向引物和反向引物各1 μL ，即10 μmol/L，DNA 模板，即10 ng/μL， 5 μL、Taq 酶 1 μL， 即5 U/μL，ddH2O 补足总体积到50 μL；    PCR扩增条件：94℃预变性 4 min；94℃变性 45 s，55℃退火 45 s，72℃ 延伸 1min，共35个循环；72℃延伸7 min；其4 按矩阵设计点制芯片：矩阵结构：矩阵的排列方式为10×5，每行的最后一个点为阳性定位探针，第一行为阳性定位探针A,第二行为绵羊源性探针Sheep，第三行为山羊源性探针Goat，第四行为空白对照 B，第五行为阴性探针 N；其5 杂交及清洗 ：将PCR产物和杂交液等量混合，即总体积为80μL；其中杂交液由25%甲酰胺，3×SSC ，5×Dehartdt液，0.2%SDS配成，将等量混合物转移到PCR管中，在PCR仪上、95℃、热变性5min，冰浴骤冷5min，再将其点到芯片后盖上盖玻片，放入杂交仪中，42℃杂交2h，杂交完成后，分别用2×SSC，0.2% SDS洗液A预热至42℃，清洗两次，各2min；用0.2% SDS洗液B预热至42℃，清洗一次，2min。