[发明专利]一种从土壤中快速检测香蕉枯萎病菌热带4号小种的方法

摘要

本发明公开了一种从土壤中快速检测香蕉枯萎病菌热带4号小种的方法，包括如下步骤：1)对样品进行预处理，提取备检样品的DNA；2)特异性引物的制备；3)进行DNA环介导等温扩增技术反应；4)结果分析，在反应产物中加入1μl的核酸染料、瞬时离心至充分混匀，静止用肉眼观察。本发明的DNA环介导等温扩增技术，高特异性、灵敏度高、易操作、用时短、不易受污染物的影响且能现场检测土壤样品，也不需要昂贵而精密的温度循环装置，分析判断反应产物的方法极为简单，只需肉眼观察即可，适宜于广泛地推广应用。

主权项

一种从土壤中快速检测香蕉枯萎病菌热带4号小种的方法，包括如下步骤：1)、样品预处理对样品进行预处理，提取备检样品的DNA；2)、特异性引物的制备特异性引物包含内引物和外引物各一对，两对引物分别为，外引物FocTR4‑F3：5′‑CACGTTTAAGGTGCCATGAGAG‑3′，外引物FocTR4‑B3：5′‑CGCACGCCAGGACTGCCTCGTGA‑3′，内引物FocTR4‑FIP：5′‑ATTCAAGCCGGATTGACGGATTGGATATGTAGAGAATGTGGTGG‑3′，内引物FocTR4‑BIP：5′‑GGGAGCCAAGAAGAAGCAGGACCTTCGATTCTTGTATC‑3′：3)、进行DNA环介导等温扩增技术反应将经前处理的DNA、引物、反应缓冲液与Bst DNA聚合酶混合，在63℃保温90min进行循环链置换反应；4)、结果分析在反应产物中加入核酸染料、瞬时离心至充分混匀，静止用肉眼观察。