[发明专利]一种清肝片的定性定量检测方法

摘要

本发明公开了一种清肝片的定性定量检测方法，改进了原有清肝片中茵陈的定性鉴定方法，增加了（1）采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；（2）采用薄层色谱法，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有板蓝根；（3）采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量。与现有技术相比，本发明方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，本发明方法精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了清肝片的质量可控性和稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的清肝片的定性定量检测方法，既可以用于控制清肝片的质量，又可以用来控制相同处方的其他剂型如胶囊、颗粒等剂型的质量。

主权项

一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，其特征在于还包括①采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤：(1)取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.3～1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇‑乙醇‑氨试液＝4～6:1.5～2.5:0.5～1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细短，导管直径7～51μm；木纤维多成束或单个散在，直径14～20μm，微木化，纹孔及孔沟明显；(3)取本品，除去包衣，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材1～3g，同法制成茵陈对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加乙醇制成溶液；照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为60～90℃的石油醚‑乙酸乙酯‑丙酮＝5～9:0.2～0.7:1.5～3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5％氢氧化钾溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)甘草酸含量测定：照中国药典2010年版一部附录ⅥD的高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑0.01～0.03mol/L磷酸溶液＝30～50:70～50为流动相；流速为0.5‑1.0mL/min；检测波长为250nm；柱温25～35℃；理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含甘草酸铵40μg的溶液，即得(折合甘草酸为39.2μg)；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50～80％乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50～80％乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于0.4mg；(5)绿原酸含量测定：照中国药典2010年版一部附录ⅥD的高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑0.01～0.03mol/L磷酸溶液＝5～15:95～85为流动相；流速为0.5～1.0mL/min；检测波长为327nm；柱温25～35℃；理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000；对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含绿原酸0.01mg的溶液；即得；供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50～80％乙醇，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用50～80％乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含茵陈以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于0.12mg。