[发明专利]一种含凝血酶切割位点GST膜型表达载体及转染阳性细胞的方法有效
| 申请号： | 201310298819.6 | 申请日： | 2013-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN103388001A | 公开（公告）日： | 2013-11-13 |
| 发明（设计）人： | 张圆;庄然;李琦;张赟;金伯泉 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12N5/10 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 徐文权 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种含凝血酶切割位点GST膜型表达载体及转染阳性细胞的方法，GST表达后在信号肽的引导下穿出细胞膜，并在跨膜区的作用下固着于细胞膜表面，成为转染细胞新的筛选标签——膜型GST（mGST），通过针对GST单克隆抗体的特异性结合、免疫磁珠吸附进行分选细胞，简化筛选步骤，富集阳性细胞，提高转染阳性细胞比率。本发明可以有效富集阳性细胞，提高转染阳性细胞的比率，是一种可以高效分选出转染阳性细胞的技术手段，通过本发明的分选，富集阳性细胞，使阳性细胞比例上升到95%以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 凝血酶 切割 gst 表达 载体 转染 阳性 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种含凝血酶切割位点GST膜型表达载体，其特征在于，包括两端分别设有MCS A和MCS B的IRES序列，其中MCS A用于外源目的基因的插入，MCS B插入有mGST基因，插入目的基因后与mGST基因构成双顺反子，受同一启动子控制；所述的mGST基因包括GST基因，在GST基因上游连接有穿膜信号肽序列LS，在其下游连接有凝血酶切割的识别位点和疏水性氨基酸的跨膜区序列MT。
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