[发明专利]基于探针标记免疫金-磁性复合材料检测甲胎蛋白的SERS方法

摘要

一种基于探针标记免疫金-磁性复合材料检测甲胎蛋白的SERS方法，属于蛋白质分析检测技术领域。包括P-巯基苯甲酸(MBA)分子修饰的金纳米粒子与甲胎蛋白抗体结合、制备表面功能化的Fe3O4@SiO2磁性复合材料、血清中的甲胎蛋白吸附到此功能化的Fe3O4@SiO2磁性复合材料上、免疫金探针和修饰了甲胎蛋白抗原的Fe3O4@SiO2磁性复合材料发生免疫反应；进行拉曼光谱检测等步骤；将得到的待测蛋白质的拉曼图谱特征峰的拉曼强度值代入“拉曼强度与甲胎蛋白抗原浓度工作曲线”，即可测得甲胎蛋白的浓度。此方法具有超灵敏性，高选择性和检测条件温和等优点，在临床分析诊断中具有非常重要的意义。

主权项

一种基于探针标记免疫金‑Fe3O4磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：(a)制备P‑巯基苯甲酸MBA分子标记的金纳米粒子溶液，并与甲胎蛋白抗体结合，同时用BSA试剂进行封闭；(b)制备SiO2包覆的Fe3O4磁性复合材料；(c)制备醛基化的SiO2包覆的Fe3O4磁性复合材料，然后配制成PBS分散液；(d)将一系列已知浓度的甲胎蛋白抗原的PBS溶液分别和步骤(c)的溶液等体积混合，同时用等体积的BSA试剂进行封闭；(e)将步骤(a)溶液和步骤(d)溶液按体积比1:1混合，在37℃下温育1～2小时进行免疫反应；此时，结合在金纳米粒子上的甲胎蛋白抗体和吸附到醛基化SiO2包覆的Fe3O4磁性复合材料上的甲胎蛋白抗原发生免疫反应；(f)将上步骤免疫反应后的溶液进行拉曼光谱检测，得到一系列已知浓度的甲胎蛋白抗原的拉曼图谱，以甲胎蛋白抗原浓度的对数值为横坐标，以对应的1078cm‑1位置处的拉曼强度值为纵坐标，绘制定量分析标准工作曲线；(g)将待测甲胎蛋白浓度的血清和步骤(c)溶液等体积混合，在37℃下温育1～2小时；然后将步骤(a)溶液和本步骤溶液等体积混合，在37℃下温育1～2小时，二者发生免疫反应；将免疫反应后溶液进行拉曼光谱检测，得到拉曼光谱图，读出此光谱在1078cm‑1位置处的拉曼强度值，将此拉曼强度值带入定量分析标准工作曲线，即可得到血清中甲胎蛋白的浓度。