[发明专利]微量循环肿瘤细胞的分离方法

摘要

本发明公开了分离富集全血中循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）的方法，更好地为肿瘤细胞进行后续研究提供基础，涉及生物医学领域。方法包括树状分子与可特异性结合靶细胞的物质（特异性物质）共价偶联、特异性物质修饰的树状分子再包被长链生物素分子、特异性物质和长链生物素共修饰的树状分子捕获全血样品中的CTCs、链霉亲和素修饰的纳米磁珠识别并偶联全血中长链生物素化树状分子、被捕获CTCs的分离及重悬等步骤。重悬液可以直接进行后续分析，与传统的细胞分离方法相比，该方法更适用于在复杂全血样品中对CTCs进行磁分离，缩短了磁分离的时间，提高了全血样品中CTCs分离效率。

主权项

微量循环肿瘤细胞的分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)氨基化树状分子与循环肿瘤细胞相应的特异性物质偶联，摩尔投料比为1:1，形成树状分子‑特异性物质复合物；(2)将树状分子‑特异性物质复合物与长链生物素偶联，加入过量长链生物素以封闭树状分子上裸露的氨基位点，形成长链生物素‑树状分子‑特异性物质复合物;(3)将上述长链生物素‑树状分子‑特异性物质复合物溶液加入到全血样品溶液中，以捕获全血样品溶液中的CTCs，形成长链生物素‑树状分子‑特异性物质‑CTCs复合物；(4)将修饰有链霉亲和素的纳米磁珠加入到上述混合溶液中通过链霉亲和素与长链生物素的亲和作用捕获长链生物素‑树状分子‑特异性物质‑CTCs复合物，以形成终复合物纳米磁珠‑链霉亲和素‑长链生物素‑树状分子‑特异性物质‑CTCs；(5)将终复合物溶液置于磁力架上进行分离，去离子水轻轻清洗后，用PBS缓冲液重悬即得富集有CTCs的的纳米磁珠‑链霉亲和素‑长链生物素‑树状分子‑特异性物质‑CTCs复合物。