[发明专利]一种实时荧光LAMP法快速检测牛羊肉中猪源性成分的方法

摘要

本发明公开了一种实时荧光LAMP法快速检测牛羊肉中猪源性成分的方法，该方法采用环介导恒温扩增技术(LAMP)结合实时荧光的方法检测牛肉、羊肉中猪特异性细胞色素b基因。其检测方法是通过提取待检肉类的基因组DNA，采用6条特异性引物及具有链置换活性的Bst DNA聚合酶大片段，于60-65℃扩增45-60分钟，反应体系中加入SYBR GREEN I，可实时检测样品模版的扩增情况，从而判断牛肉、羊肉样品中是否含有猪源性成分。本发明具有高灵敏度、高特异性、简单、快速、结果不需要凝胶电泳等优点。

主权项

一种实时荧光LAMP法快速检测牛羊肉中猪源性成分的方法，其特征在于：该方法利用环介导恒温扩增技术结合实时荧光的方法检测牛肉、羊肉中猪特异性细胞色素b基因，操作步骤为：(1)待检样品基因组DNA的提取：采用CTAB法提取纯化样品DNA；(2)配制反应液，构建成检测体系；所述的反应液包括ddH2O、引物工作液、荧光指示剂SYBR GREEN I、Buffer、Bst DNA聚合酶大片段和样品DNA；所述的引物工作液中包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的内引物、核苷酸序列如SEQ ID NO：3的环引物，及核苷酸序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5的外引物，且反应体系中内引物/环引物/外引物浓度为1.2μM/0.2μM/0.2μM；(3)恒温扩增反应：将所述反应液离心混匀，并于60‑65℃反应45‑60min；设置阴性对照，样品为灭菌超纯水，其余同所述反应液；(4)扩增反应之后进行酶灭活处理，灭活温度为80℃，时间为5‑15min；(5)结果判断：根据实时荧光图来判断扩增结果。