[发明专利]用生物反应器扩增重组腺病毒的优化工艺方法有效
| 申请号： | 201310114752.6 | 申请日： | 2013-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN103160478A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 陈科达;吴洁;王一虎;姜云水;庄昉成;金素凤;高孟;张锋;李剑波;陈刚;毛子安;毛江森 | 申请（专利权）人： | 浙江普康生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 高丽敏;韩介梅 |
| 地址： | 310053 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，特别是用于扩增重组腺病毒时所用到的一套全面优化的工艺方法。该方法用聚纤维纸片载体利用生物反应器扩增人胚肾细胞（HEK293）从而建立腺病毒复制扩增的全套工艺流程。本发明建立在对5型腺病毒复制扩增体系全面适应的条件下，在细胞培养阶段用含10%的血清的DMEM培养基，在病毒接种吸附后至20小时使用带5%的血清DMEM培养基，在收获病毒阶段采用无血清培养基添加0.25%的水解乳蛋白，同时每20小时补充2g/L的葡萄糖，采用批式收获换液的方式，该方法在减轻后期纯化难度并适应生物制品的要求的基础上，使优化工艺达到较高的病毒滴度。因此本发明所建立的优化工艺是具有良好重复性、高效重组腺病毒扩增工艺，可适用于任何以聚纤维纸片为载体的生物反应器扩增重组腺病毒。 | ||
| 搜索关键词： | 生物反应器 扩增 重组 病毒 优化 工艺 方法 | ||
【主权项】：
一种用生物反应器扩增重组腺病毒的优化工艺方法，其特征在于用聚纤维纸片载体利用生物反应器扩增人胚肾细胞HEK293，建立腺病毒复制扩增的工艺流程，对5型腺病毒复制扩增体系全面适应的条件下，在细胞培养阶段用含10%的胎牛血清的DMEM培养基，培养细胞6‑7天后换液成无血清培养基，吸附腺病毒2.5‑3.5小时，加入3‑5%胎牛血清，继续培养20小时，弃去全部培养液，并用磷酸缓冲液PBS冲洗去除血清，全部换成无血清培养基加0.25%水解乳蛋白，静止再吸附1.5‑2.5小时以利于病毒再感染正常细胞，同时每20小时补充2g/L的葡萄糖，采用批式收获换液的方式，使优化工艺达到较高的病毒滴度。
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