[发明专利]一种丁酸梭状芽孢杆菌活菌制剂的固体发酵生产方法

摘要

本发明涉及一种丁酸梭状芽孢杆菌活菌制剂的生产方法，属于微生物技术领域，具体涉及一种丁酸梭状芽孢杆菌微生态制剂的固体发酵生产方法。它包括以下步骤：采用丁酸梭状芽孢杆菌作为发酵菌种，接种于经过优化的固体发酵培养基中，35～42℃隔绝空气培养48～72h，然后放罐并测定活菌密度，干燥，粉碎，包装成产品。该生产方法的优点是：生产工艺简单稳定，易于推广使用；采用豆饼粉和玉米粉作为培养基主要成分，大大降低了生产成本；活菌体密度高，芽孢成熟率高，产品质量稳定；发酵产物无需分离纯化可以直接干燥使用，降低了成本，提高了产品质量。

主权项

一种丁酸梭状芽孢杆菌微生态制剂的制备方法包括以下步骤：  （1） 菌种的活化与增值：   本发明采用丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium butyricum）作为发酵菌种，菌种编号：1.336，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心；从平板上挑取丁酸梭状芽孢杆菌单菌落，接种到装有20mL梭菌种子培养基（胰化蛋白胨 10g/L，酵母提取物 5g/L，牛肉浸膏5g/L，葡萄糖10g/L，CaCl2 0.2 g/L，MgSO4·7H2O 0.4 g/L，MnSO4·H2O 0.5g/L，盐酸半胱氨酸0.25 g/L，调pH7.0，高温高压灭菌备用）的试管中，37℃深层静置培养48小时，培养后的菌液于80℃水浴处理10min灭除营养体并激活芽孢萌发；处理后的菌液以3%的接种量接种到装有适当体积丁酸梭菌种子培养基的三角瓶中，37℃深层静置培养备用；若培养基灭菌后未立即使用，则需在沸水浴中加热10min驱氧后使用；   （2）配制固体发酵培养基：固体干基：以玉米粉和豆饼粉为基础料（玉米粉与豆饼粉的质量之比为1:5），葡萄糖2.0%，CaCl2 0.02%，MgSO4·7H2O  0.04%，MnSO4·H2O 0.04%，生物素0.01%；将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，调pH 6.0~7.5，搅拌均匀；装料系数40~60%，将固体干基加入固体发酵罐内，经115℃、20min高温高压灭菌，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；   （3）固体发酵：待经过灭菌处理的固体发酵培养基降温至35~45℃时，按照5~8%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，然后加入液体石蜡至厚度为1~2cm，保持固体培养基的湿度为40~60%，控制 pH 6.0~7.5，发酵温度控制在30~42℃，发酵48~72个小时；将丁酸梭状芽孢杆菌培养物进行菌落计数，经过这样发酵的活菌体浓度可达1.5~2.0×109 CFU/g 鲜曲，芽孢形成率在90%以上；   （4）将固体发酵的丁酸梭状芽孢杆菌培养物进行烘干干燥，粉碎和包装，制成用于畜禽养殖的微生态饲料添加剂。