[发明专利]一种小麦组织胼胝质的快速检测方法

摘要

一种小麦组织胼胝质的染色与观察方法，属于植物组织化学定位技术领域。主要包括以下步骤：（1）配制溶液（2）材料处理；（3）切片制作；（4）材料染色；（5）制片（5）激光激发装置激发，荧光显微镜观察与拍照。本发明采用徒手切片方法，用胼胝质专一性荧光染料—水溶性苯胺蓝在碱性条件下对徒手制作的小麦组织切片进行染色，显著缩短样品切片制作、染色与观察周期，保证胼胝质定位准确。本发明可操作性强，所制作切片便于观察，采集图像清晰。

主权项

一种小麦组织胼胝质的快速检测方法，其特征是，包括以下步骤：（1）溶液的配制：固定液的配制：将乙醇与三氯甲烷按体积比为3：1混合后作为混合溶剂，以上述混合溶剂为溶剂配制体积分数为0.15%的三氯乙酸溶液；染色负载缓冲液的配制：配制pH=8.5～9.5的50～150mmol/L的K2HPO4缓冲液或Tris‑HCl缓冲液；然后将0.01g水溶性苯胺蓝溶解于100ml上述缓冲液中，即为染色负载缓冲液；（2）材料处理：取小麦茎组织或叶组织，蒸馏水清洗干净，若立刻进入实验室操作，则用吸水纸吸干；若不能即刻进入实验操作，则将小麦茎组织或叶组织切成3～5mm长的组织块，用固定液固定，染色时将材料取出，依次用50%乙醇、蒸馏水洗净，然后用吸水纸吸干；（3）徒手切片制作：用锋利刀片，将经过步骤（2）处理的小麦茎组织或叶组织切割成厚度为20～40μm切片，置于载玻片上；（4）材料染色：用移液枪或者移液管吸取100～150μL的样品染色负载缓冲液滴到置于载玻片的切片上，然后将载玻片置入抽真空器皿中，密封后用真空泵抽气5～8min，随后在25℃条件下避光放置5～10min，用移液枪吸掉样品上的染色负载缓冲液，之后用移液枪吸取蒸馏水漂洗染色后的切片；（5）将100μL50%甘油滴在切片表面，然后用盖玻片封片；（6）显微镜观察拍照：将经过步骤（5）处理的切片放置在落射荧光显微镜上，用激光激发装置激发，在显微镜下观察，并用CCD图像采集系统拍照。