[发明专利]一种制备乳酸脱氢酶的方法及应用

摘要

本发明公开了一种制备乳酸脱氢酶的方法及应用，该方法包括：改造全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的乳酸脱氢酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备乳酸脱氢酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。

主权项

一种制备乳酸脱氢酶的方法，其特征在于，该方法包括：1)改造全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤1)中改造后的乳酸脱氢酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni‑NTA柱纯化；其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列为：1   ATGGATCATC ATCATCATCA CCACGAAAAC CTGTATTTTCAGGGCGCAAC TCTAAAGGAT61  CAGCTGATTT ATAATCTTCT AAAGGAAGAA CAGACCCCCCAGAATAAGAT TACAGTTGTT121 GGGGTTGGTG CTGTTGGCAT GGCCTGTGCC ATCAGTATCTTAATGAAGGA CTTGGCAGAT181 GAACTTGCTC TTGTTGATGT CATCGAAGAC AAATTGAAGGGAGAGATGAT GGATCTCCAA241 CATGGCAGCC TTTTCCTTAG AACACCAAAG ATTGTCTCTGGCAAAGACTA TAATGTAACT301 GCAAACTCCA AGCTGGTCAT TATCACGGCT GGGGCACGTCAGCAAGAGGG AGAAAGCCGT361 CTTAATTTGG TCCAGCGTAA CGTGAACATC TTTAAATTCATCATTCCTAA TGTTGTAAAA421 TACAGCCCGA ACTGCAAGTT GCTTATTGTT TCAAATCCAGTGGATATCTT GACCTACGTG481 GCTTGGAAGA TAAGTGGTTT TCCCAAAAAC CGTGTTATTGGAAGCGGTTG CAATCTGGAT541 TCAGCCCGAT TCCGTTACCT AATGGGGGAA AGGCTGGGAGTTCACCCATT AAGCTGTCAT601 GGGTGGGTCC TTGGGGAACA TGGAGATTCC AGTGTGCCTGTATGGAGTGG AATGAATGTT661 GCTGGTGTCT CTCTGAAGAC TCTGCACCCA GATTTAGGGACTGATAAAGA TAAGGAACAG721 TGGAAAGAGG TTCACAAGCA GGTGGTTGAG AGTGCTTATGAGGTGATCAA ACTCAAAGGC781  TACACATCCT GGGCTATTGG ACTCTCTGTA GCAGATTTGGCAGAGAGTAT AATGAAGAAT841  CTTAGGCGGG TGCACCCAGT TTCCACCATG ATTAAGGGTCTTTACGGAAT AAAGGATGAT901  GTCTTCCTTA GTGTTCCTTG CATTTTGGGA CAGAATGGAATCTCAGACCT TGTGAAGGTG961  ACTCTGACTT CTGAGGAAGA GGCCCGTTTG AAGAAGAGTGCAGATACACT TTGGGGGATC1021 CAAAAGGAGC TGCAATTTTA A