[发明专利]烟叶微生物选择性培养基配制及培养烟叶微生物的方法

摘要

烟叶微生物选择性培养基配制及培养烟叶微生物的方法，先用废弃烟叶或烟叶碎末制备烟叶提取物，再制作烟叶细菌、真菌和放线菌的选择性培养基。称取10g新鲜或4℃保存的烟样置于盛有90mL无菌的磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌三角瓶内，于150r/min转速下震荡30min，静置20min，制成1:10的一次样品匀液；再用一次样品匀液经过多次稀释制备得到10倍系列稀释的十次样品匀液；选择2个～3个样品匀液，吸取0.1mL样品匀液涂布于烟叶细菌选择性培养基或烟叶真菌选择性培养基或烟叶放线菌选择性培养基上；细菌于30℃±1℃培养2-3d；真菌于28℃±1℃培养3-4d；放线菌于28℃±1℃培养4-5d，即得到烟叶微生物。本发明可将烟叶中的细菌、真菌、放线菌较好分离，杂菌率低。

主权项

烟叶微生物选择性培养基的配制方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备烟叶提取物：取废弃烟叶或烟叶碎末500g加10‑15倍水提取2‑4h，提取完成后将提取液过滤进行减压浓缩，浓缩至其相对密度d2020为1.053±0.008、折光指数Nd20为1.372±0.008，放置于4℃温度保存使用；（2) 制作烟叶选择性培养基，包括：a、制作烟叶细菌选择性培养基：配制烟叶细菌选择性培养基的配方为牛肉膏2.5‑3.5 g/L、蛋白胨9‑10 g/L、NaCl5‑6g/L 、烟叶提取物15‑20g/L、琼脂10‑15g/L、余量为水；烟叶细菌选择性培养基的pH7.0‑7.2；将配制好的烟叶细菌选择性培养基于115℃灭菌30分钟，临用前待烟叶细菌选择性培养基稍冷至40‑50℃时，加入10‑15µg/L潮霉素B稀释液，混匀后倒板；b、制作烟叶真菌选择性培养基：配制烟叶真菌选择性培养基的配方为葡萄糖9‑12g/L、蛋白胨4‑6g/L、KH2PO40.8‑1.2g/L、MgSO4.7H2O0.4‑0.6 g/L、烟叶提取物15‑20g/L、1/3000孟加拉红90‑120 ml、琼脂10‑15 g /L、余量为水；烟叶真菌选择性培养基的pH按自然所得；将配制好的烟叶真菌选择性培养基于115℃灭菌20分钟，临用前待烟叶真菌选择性培养基稍冷至40‑50℃时，加入8‑12 mg/L的链霉素稀释液混匀后倒板；c、制作烟叶放线菌选择性培养基：配制烟叶放线菌选择性培养基的配方为可溶性淀粉15‑20 g/L、KH2PO40.3‑0.5 g/L、MgSO4.7H2O0.3‑0.5 g/L、KNO30.8‑1.0g/L、FeSO4.7H2O0.008‑0.01 g/L、NaCl0.3‑0.5 g/L、烟叶提取物15‑20g/L、琼脂10‑15 g/L、余量为水；配制时，需先将可溶性淀粉加少量冷水调制成糊状，再加入沸水中；烟叶放线菌选择性培养基的pH7.2‑7.4；将配制好的烟叶放线菌选择性培养基于115℃灭菌30分钟，临用时在已灭菌的培养基中加入45‑60 mg/L的重铬酸钾溶液，摇匀后倒板。