[发明专利]猪伪狂犬病毒的培养方法无效
| 申请号： | 201210550961.0 | 申请日： | 2012-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN103865886A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 张述智;夏伟;朱绍辉;张浩;王晓丽;徐权汗;李之详;许团辉 | 申请（专利权）人： | 青岛中仁药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266300 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒的培养方法，利用仓鼠肾细胞（BHK-21）细胞作为猪伪狂犬病毒培养的细胞源，在细胞传代的同时接种病毒，从而进行病毒的增殖培养。该方法具有工艺简便、生长量大、得率高、成本低廉的特点，并且利用本发明培养的猪伪狂犬病毒制备的疫苗对猪伪狂犬病毒病具有完全的防治作用，具有很好的社会效益和应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 狂犬病毒 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）细胞传代，将BHK‑21细胞用胰酶‑EDTA溶液进行消化，待细胞松动后，加入DMEM细胞培养液，并用吸管将消化下来的细胞吹散均匀，倒出4/5的细胞悬液，再加入等量的DMEM细胞培养液，即将细胞密度稀释为原来的5倍；（2）病毒增殖，将PRV毒种2 %单层接种BHK‑21，并同时设未接毒的正常对照细胞，37℃孵育1h后，加入细胞维持液，置37℃、5%CO2培养箱培养，观察CPE出现的时间及特征，当细胞出现80 % CPE时收毒，冻融3次，1500 r/min离心l5min，小瓶分装上清液备用，按此方法传代至第3代，‑70 ℃冰柜保存备用。
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