[发明专利]检测高血压相关的线粒体DNA A4401G突变的试剂盒及应用

摘要

本发明提供一种检测高血压相关的线粒体DNAA4401G突变的试剂盒，由引物序列、提取样本基因组DNA的试剂、PCR扩增反应试剂、阳性标本对照、阴性标本对照以及使用说明书构成。本发明试剂盒以少量的样本（如一滴毛细血管静脉血、带毛囊的毛发、口腔粘膜刮片或唾液），通过蛋白酶K消化裂解法提取基因组DNA，通过设计引物进行分段巢式PCR扩增，然后通过特异性的限制性内切酶StyⅠ酶切鉴定的方法检出高血压相关的线粒体突变位点。本发明实现了无创伤检测，较单独进行线粒体DNAA4263G突变的检测更快速、经济、简便，且对设备及环境要求低，利于推广和应用，适用于高血压相关人群的大规模筛查和预防性检查。

主权项

一种检测高血压相关的线粒体DNA A4401G突变的试剂盒，其特征在于，由引物序列、提取样本基因组DNA的试剂、PCR扩增反应试剂、阳性标本对照、阴性标本对照构成，其中，提取样本基因组DNA的试剂主要由细胞裂解液和溶液Ⅰ组成；PCR扩增反应试剂包括脱氧单核苷酸、10×PCR缓冲液、MgCl2、三蒸水和Taq酶，所述的引物序列是：外前向引物F: TGG CTC CTT TAA CCT CTC CA，外反向引物R: AAG GAT TAT GGA TGC GGT TG；内前向引物F: AGG ACT ATG AGA ATC GAA CC，内反向引物R: AAT CAG TGC GAG CTT AGC G；限制性内切酶包括限制性内切酶BfaⅠ；阳性标本对照是含有线粒体序列第4401位点发生A>G突变的酶切样本、阴性标本对照是不含有线粒体序列第4401位点发生A>G突变的酶切样本；所述溶液Ⅰ的主要成分是蛋白酶K。