[发明专利]石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒

摘要

本发明涉及免疫化学及分析生物技术领域，尤其涉及石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒。本发明的目的是提供一种石杉碱甲含量的ELISA检测和分析方法，利用制备的石杉碱甲人工抗原免疫动物，将免疫小鼠的皮细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，制备抗石杉碱甲的单克隆抗体，制备石杉碱甲的酶联免疫检测试剂盒检测石杉碱甲的含量。本发明有益效果：本发明特异性强，样品前处理简便，灵敏度高，便于进行现场监测。所需仪器设备简单，检测成本低、时间短、过程简化，样品量少，实用性强，可以满足中医药开发利用及其有关研究单位批量检测相关植物体内石杉碱甲含量的需要。

主权项

1.一种石杉碱甲单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1利用戊二醛法合成石杉碱甲人工抗原，所述石杉碱甲人工抗原的结构如结构式1所示：所述结构式1中，R为BSA、OVA、KLH、HSA，BSA是牛血清白蛋白，OVA是卵清蛋白，KLH是钥孔血蓝素，HSA是人血清白蛋白；步骤2利用步骤1所得的石杉碱甲人工抗原制备石杉碱甲单克隆抗体；步骤21用石杉碱甲人工抗原免疫小鼠，检测其效价；步骤22将效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG下融合，获得阳性杂交瘤细胞，并采用有限稀释法进行阳性杂交瘤细胞的亚克隆；步骤23采用小鼠体内诱导法生产石杉碱甲单克隆抗体；步骤24采用辛酸硫酸铵沉淀法、免疫亲和层析法纯化抗体，检测石杉碱甲单克隆抗体的效价和纯度。