[发明专利]一种高密度培养基因工程菌制备褐藻胶裂解酶的方法无效
| 申请号： | 201210401888.0 | 申请日： | 2012-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN102864136A | 公开（公告）日： | 2013-01-09 |
| 发明（设计）人： | 汪立平;李安雪 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海硕力知识产权代理事务所 31251 | 代理人： | 王法男 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种高密度培养基因工程菌生产褐藻胶裂解酶的方法：将褐藻胶裂解酶基因工程菌从保藏的甘油管接种于LB液体培养基中，35-37℃,150rpm，培养10-12h，得到活化液菌种；将活化液菌种转接至LB种子培养基中，在35-37℃,150rpm，摇瓶培养10-12h，得到种子液；将2%种子液转接至含有3L发酵培养基的5L发酵罐中，进行高密度发酵培养，待发酵到第4h时开始流加补充培养基；并在发酵到第4.5h后进行IPTG诱导；发酵过程中罐内参数设定为：温度35-37℃，转速280rpm，溶氧40%-50%，发酵24h得到发酵液；将发酵液在4℃下、经12000rpm/min离心10min去除上清液后收集菌体，将收集的菌体在冰浴下进行超声波破碎处理；随后将超声波破碎液在4℃下、12000rpm/min离心10min去除细胞碎片沉淀，收集上清液得到粗酶液。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高密度 培养 基因工程 制备 褐藻 裂解 方法 | ||
【主权项】：
一种利用褐藻胶裂解酶基因工程菌的高密度培养生产褐藻胶裂解酶的方法步骤如下：1)将褐藻胶裂解酶基因工程菌从保藏的甘油管接种于LB液体培养基中，35‑37℃,转速为150r/min，培养10‑12h，得到活化液菌种；2)将上述活化液菌种转接至LB种子培养基中，在35‑37℃,转速为150r/min，摇瓶培养10‑12h，得到种子液；3）将上述2%种子液转接至含有3L发酵培养基的5L发酵罐中，进行高密度发酵培养，待发酵到第4h时开始流加补充培养基；并在发酵到第4.5h后进行IPTG诱导；发酵过程中发酵罐的参数控制为：温度35‑37℃，转速280r/min，溶氧40%‑50%，发酵24h，得到发酵液；4）将上述发酵液在4℃下、经12000rpm/min离心10min去除上清液后收集菌体，将收集的菌体在冰浴下进行超声波破碎处理；随后将超声波破碎液在4℃下、12000rpm/min离心10min去除细胞碎片沉淀，收集上清液得到粗酶液。
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