[发明专利]一种使用辣根过氧化物酶标抗体检测猪瘟弱毒病毒滴度的方法

摘要

一种采用辣根过氧化物酶免疫技术检测猪瘟病毒弱毒滴度的方法，其特点是将传代贴壁细胞MPK细胞接种到96孔培养板中，用适宜的生长培养基维持其生长，MPK细胞在96孔板中快速增殖，当细胞长为单层后接种猪瘟病毒，并继续培养令病毒增殖，若干天后加入辣根过氧化物酶标抗体和底物，经过孵育使细胞培养物显色。本发明采用辣根过氧化物酶免疫技术，可在MPK细胞中标记出病毒的存在，使用PEG增加病毒与细胞的聚合度从而促进其感染，其灵敏度高于药典规定的动物实验测定病毒滴度的方法，可以作为企业质量内控的方法。

主权项

一种采用辣根过氧化物酶免疫技术检测猪瘟病毒弱毒滴度的方法，其特征在于在于挑选出对猪瘟弱毒株高度敏感的MPK传代细胞，将此细胞在96孔培养板中培养至长满单层，之后接种不同稀释度的猪瘟病毒，持续培养后，加入辣根过氧化物酶标记的抗体共同孵育，最后加入底物使受到感染的细胞培养物显色，通过显色的孔数占总孔数的百分比计算病毒滴度，具体步骤为：(1)使MPK细胞在96孔培养板中长成单层；(2)将待测病毒液进行梯度稀释，接种于细胞单层，用维持培养基维持细胞生长；(3)持续培养72～120小时后，将细胞培养物热固定，加入辣根过氧化物酶标抗体在37℃下孵育，再加入底物于常温下孵育；(4)在显微镜下观察细胞培养物的显色情况，根据显色孔数的百分比计算病毒的滴度。