[发明专利]外源基因在沙门氏菌中表达优化的方法无效
| 申请号： | 201210298723.5 | 申请日： | 2012-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN103074357A | 公开（公告）日： | 2013-05-01 |
| 发明（设计）人： | 徐家华;陈瑞爱;张东霞;汤钦 | 申请（专利权）人： | 广东大华农动物保健品股份有限公司;肇庆大华农生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/67 | 分类号： | C12N15/67;C12N15/74 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 汤喜友 |
| 地址： | 527400 广东省云浮市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，包括如下具体步骤：从NCBI数据库中统计获得沙门氏菌密码子使用频率表；分析各密码子使用频率：克隆或者合成目的基因，并且测定其核苷酸序列，根据上述沙门氏菌密码子使用频率表和氨基酸密码子对应表，在不改变氨基酸的情况下，通过分子突变或者基因合成的方式，把所述目的基因中沙门氏菌使用频率最低和较高的密码子突变成为使用频率最高的密码子，获得新的编码目的基因的核苷酸片段；通过分子生物学方法把新的编码目的基因的核苷酸片段插入到表达载体中，而后转入基因工程大肠杆菌，对获得的克隆进行鉴定；将鉴定正确的含目的基因的表达载体导入沙门氏菌中。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 沙门氏菌 表达 优化 方法 | ||
【主权项】：
外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：步骤1：从NCBI数据库中获得沙门氏菌基因的开放阅读框，将开放阅读框转化成为氨基酸序列，然后按照三个核苷酸编码一个氨基酸的方法，逐一统计每个沙门氏菌基因的开放阅读框的每个氨基酸对应的核苷酸，即编码氨基酸的核苷酸密码子，最终获得沙门氏菌密码子使用频率表；步骤2：分析沙门氏菌密码子使用频率表可知，其中密码子UAA、UGA、UAG、CGA、AGA、AGG、UGU使用的频率最低；而CUA、UCU、UGC、UCA 、CCU、CCC、CCA、CGG、AGU、AUA、ACA、GGA、CAC和ACU密码子使用频率较高；其余密码子使用频率最高；步骤3：克隆或者合成目的基因，并且测定其核苷酸序列，根据上述沙门氏菌密码子使用频率表和氨基酸密码子对应表，在不改变氨基酸的情况下，通过分子突变或者基因合成的方式，把所述目的基因中沙门氏菌使用频率最低和较高的密码子突变成为使用频率最高的密码子，获得新的编码目的基因的核苷酸片段； 步骤4：通过分子生物学方法把新的编码目的基因的核苷酸片段插入到表达载体中，而后转入基因工程大肠杆菌，对获得的克隆进行鉴定；步骤5：将步骤4鉴定正确的含目的基因的表达载体导入沙门氏菌中，并在沙门氏菌中对目的基因进行诱导表达。
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