[发明专利]一种虾类胚胎的细胞核染色方法有效
| 申请号： | 201210245038.6 | 申请日： | 2012-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN102749243A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 马文明;杨卫军;钱叶青;俞炎琴;杨帆;杨劲树;庄浩瀚 | 申请（专利权）人： | 浙江大学舟山海洋研究中心 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 杜军 |
| 地址： | 316021 浙江省舟山*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公布了一种虾类胚胎的细胞核染色方法。本发明方法首先取虾类胚胎置于3～5倍胚胎体积的A溶液中,静置分层后移除上层液相；加入2倍胚胎体积的正庚烷和4倍胚胎体积的甲醇，静置分层后移除上层溶液和中间层膜状组织；加入3～5倍胚胎体积的甲醇进行洗涤，重复洗涤3～5次；加入3～5倍胚胎体积的缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次；避光浸泡在1～2倍胚胎体积的浓度为5～10μg/ml的DAPI溶液中进行细胞核染色，静置分层后移除液相；加入3～5倍胚胎体积的磷酸缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到最终的胚胎。本发明操作方法简单，实施步骤快捷，染色效果清晰。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 胚胎 细胞核 染色 方法 | ||
【主权项】：
一种虾类胚胎的细胞核染色方法，其特征在于该方法的具体步骤：步骤(1).取虾类胚胎，置于3～5倍胚胎体积的A溶液中,常温条件下振荡20～40分钟，得到第一次处理后的胚胎液； 所述的A溶液为体积比为1:1的正庚烷和多聚甲醛溶液的混合液，其中多聚甲醛溶液中多聚甲醛的质量含量为4﹪；步骤(2).待第一次处理后的胚胎液静置分层后用移液枪移除上层液相，得到的固相为第一次处理后的胚胎；步骤(3).将第一次处理后的胚胎重新加入2倍胚胎体积的正庚烷和4倍胚胎体积的甲醇，充分混合后得到第二次处理后的胚胎液；步骤(4).待第二次处理后的胚胎液静置分层后用移液枪移除上层溶液和中间层膜状组织，得到第二次处理后的胚胎；步骤(5).将第二次处理后的胚胎加入3～5倍胚胎体积的甲醇进行洗涤，静置分层后用移液枪移除液相，重复洗涤3～5次，得到第三次处理后的胚胎；步骤(6).将第三次处理后的胚胎加入3～5倍胚胎体积的缓冲液进行洗涤，静置分层后用移液枪移除液相，重复洗涤3～5次，得到第四次处理后的胚胎；所述的缓冲液为含有曲拉通X‑100的磷酸缓冲液，缓冲液中曲拉通X‑100的体积含量为0.3﹪；步骤(7).将第四次处理后的胚胎避光浸泡在1～2倍胚胎体积的浓度为5～10ug/ml的DAPI溶液中15～30分钟，进行细胞核染色，得到染色后的胚胎液；步骤(8).待染色后的胚胎液静置分层后用移液枪移除液相，得到染色后的胚胎；步骤(9).将染色后的胚胎加入3～5倍胚胎体积的磷酸缓冲液进行洗涤，静置分层后用移液枪移除液相，重复洗涤3～5次，得到最终的胚胎。
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