[发明专利]椰子成熟合子胚离体培养体细胞胚胎发生方法

摘要

本发明属于农业生物技术领域，涉及一种椰子成熟合子胚离体培养体细胞胚胎发生方法，是选取成熟椰果，取出胚接种到预培养基中进行暗培养使胚膨大；取经过预培养的膨大的胚，将其吸器切除并纵切成两半，切面朝上接种到愈伤组织诱导培养基中进行暗培养得到胚性愈伤组织；将胚性愈伤组织转接到体胚诱导培养基中培养80～100天形成体细胞胚。本发明工艺简单，利用椰子成熟合子胚为外植体诱导体细胞胚胎发生，解决了利用椰子未成熟花序或幼胚等获得体细胞胚的外植体采集时间受季节限制的问题，为深入开展椰子的基因工程、遗传转化、品种改良等方面的研究提供了一条有效途径。

主权项

一种椰子成熟合子胚离体培养体细胞胚胎发生方法，其特征在于，包括胚的采集与预培养过程、胚性愈伤组织的诱导过程、体细胞胚胎发生过程，其步骤如下：1）、胚的采集与预培养过程选取10～11月龄的成熟椰果，取出内有完整胚的固体胚乳块，清洗后取出胚消毒，然后接种到预培养基中，置于相对湿度为70～80%、温度25～29℃的条件下进行暗培养12～17天，使胚膨大；所述预培养基是以Y3培养基为基本培养基，并添加活性炭2.5g/L、蔗糖60g/L；2）、胚性愈伤组织的诱导过程取经过预培养的膨大的胚，将其吸器切除并纵切成两半，切面朝上接种到愈伤组织诱导培养基中，置于相对湿度为70～80%、温度25～29℃的条件下进行暗培养170～200天产生淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是以Y3培养基为基本培养基，并添加2,4‑D 25mg/L、活性炭2.5g/L、PVP 5g/L、琼脂 4.5g/L、蔗糖30g/L；3）、体细胞胚胎发生过程将胚性愈伤组织转接到体胚诱导培养基中，置于相对湿度为70～80%、温度25～29℃、光照强度1500～2500lx、光照12h/d的条件下培养80～100天形成体细胞胚；所述体胚诱导培养基是以Y3培养基为基本培养基，并添加6‑BA 10mg/L、2,4‑D 2mg/L 、活性炭2.5g/L、PVP 5g/L、琼脂 4.5g/L、蔗糖30g/L。