[发明专利]卵巢组织异体发育的方法

摘要

本发明公开了卵巢组织异体发育的方法，包括以下步骤：（1）移植卵巢组织的准备；（2）卵巢组织的移植；（3）卵巢组织的收获；（4）卵母细胞的成熟。本发明采用受体小鼠的肾脏作为卵巢组织移植发育的载体，将异体卵巢组织移植在受体小鼠的肾包膜下，使卵巢组织借助肾包膜同肾脏表面紧密结合，该移植方法具有不破坏肾脏组织、对肾脏和受体小鼠损害最小及操作简单等特点，因此，该方法可作为物种卵母细胞资源的储备，对于挖掘遗传资源开展现代畜牧业的遗传育种、新品种培育和濒临灭绝野生动物的保护等均具有着重要的意义。

主权项

卵巢组织异体发育的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1） 移植卵巢组织的准备颈椎脱臼处死新生小鼠，分离出新生小鼠的卵巢组织，放入预热的含青霉素与链霉素的PBS液中清洗后，临时培养于37℃预热的组织培养液中；所述组织培养液的成分为PBS液 + 10% FBS+ 100 U/ml 青霉素 + 100 mg/ml链霉素；（2） 卵巢组织的移植受体母鼠移植程序为：受体小鼠麻醉后，对受体小鼠两侧背部剪毛，酒精背部消毒，置受体小鼠于热台上，使其背部向上；在小鼠左侧背腹部开口，摘除卵巢，拉出肾脏，将肾脏暴露于体外，在肾脏被膜打开一个开口，揭起肾脏被膜，将卵巢组织块移植入肾被膜下，把肾脏送入腹腔，喷洒青链霉素粉末，缝合伤口；右侧腹部开口，摘除另一侧卵巢，喷洒青链霉素粉末，缝合伤口；受体公鼠移植程序为：小鼠经麻醉后，酒精消毒，置于热台上，腹部向上，轻压腹部使睾丸下降至阴囊；剪开阴囊，摘除双侧睾丸，喷洒青链霉素粉末后，缝合伤口；翻动小鼠使其背部向上，剪去背毛，左侧背腹部开口，拉出肾脏，将肾脏暴露于体外，在肾脏被膜打开一个开口，揭起肾脏被膜，将卵巢组织块植入被膜下，把肾脏送入腹腔，喷洒青链霉素粉末，缝合伤口；（3） 卵巢组织的收获卵巢组织移植后的第28天，颈椎脱臼处死受体小鼠，背侧剖开腹腔，取出肾脏，在含青霉素与链霉素的磷酸盐缓冲液中清洗后，于37℃预热的所述组织培养液中分离出卵巢组织移植物，机械法分离卵母细胞及各级卵泡，经计数后于体外培养；（4） 卵母细胞的成熟对于收获的卵母细胞，将其在α‑MEM培养液中清洗后，置于卵母细胞体外成熟培养液中进行成熟培养16小时，培养条件为37°C、5% CO2、100%湿度；所述卵母细胞体外成熟培养液的组成成分为α‑MEM + 10IU/ml PMSG + 10IU/ml hCG+ 10ng/ml EGF + 5% FBS。