[发明专利]一种金钱鱼肾细胞体外培养方法

摘要

本发明涉及一种金钱鱼肾细胞体外培养方法，所述的培养方法包括以下步骤：（1）配置L-15基础培养基、原代培养基、含bFGF的原代培养基和传代培养基；（2）金钱鱼肾细胞原代培养：a、无菌取肾；b、消化分离肾细胞；c、接种；（3）金钱鱼肾细胞传代培养。本发明优点在于：本发明采用的金钱鱼肾细胞培养方法可重复强，效果佳；本发明对已有的海水鱼细胞培养方法进行借鉴，改良，摸索了适合金钱鱼肾细胞培养的培养方法，建立了稳定的肾细胞培养体系，首次建立了金钱鱼肾细胞系，以期为金钱鱼渗透压调节提供细胞模型，同时有助于金钱鱼功能基因组的深入研究。

主权项

一种金钱鱼肾细胞体外培养方法，其特征在于，所述的培养方法包括以下步骤：（1）配置L‑15基础培养基、原代培养基、含bFGF的原代培养基和传代培养基；（2）金钱鱼肾细胞原代培养：a、无菌取肾：取1龄健康金钱鱼，剪尾放血后取肾组织，使用含有青霉素链霉素的基础培养基冲洗，并使用含洗必泰、青霉素链霉素混合液的基础培养基浸泡除菌，剪碎；b、消化分离肾细胞：将剪碎的肾组织转移至离心管内，加入胰蛋白酶消化，然后加入含有FBS的完全培养基终止胰酶消化，用滤网过滤组织块，最后获得的细胞悬液离心；c、接种：得到的肾细胞沉淀用含有bFGF的原代培养基接种，静置培养；（3）金钱鱼肾细胞传代培养：原代肾细胞铺满瓶底80%开始传代，首次传代按1:1比例，此后按1:2比例进行传代。