[发明专利]玉蝉花的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种玉蝉花的组织培养方法，主要通过组织培养过程中初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，玉蝉花的愈伤组织的萌动率达到了96%，增殖倍数达到了4.35倍，生根率达到了100%，而移栽成活率达到了98%。

主权项

一种玉蝉花的组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤：①外植体的选择：在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；②材料处理方法：先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1 h后用紫外灯照射20 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70‑75 %的乙醇浸泡10秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了2～3滴土温80的0.1 %的升汞溶液中浸泡7min，用无菌水冲洗4次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0. 5～0. 6 cm长； ③初代培养：在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了3.0mg/L的6‑BA、1.2mg/L的NAA, 30mg/L的蔗糖，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2200lux，待培养出的外植体带芽量长至3个时，即开始下一个阶段；④继代培养：将初代培养的生长健壮的外植体新芽剪下2cm左右接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了1.3mg/L的6‑BA、0.4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2200lux，待新芽长至2.5cm时，即开始下一个阶段；⑤生根培养：将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了0.7mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA，0.2mg/L的GA，28mg/L的蔗糖，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2200lux，待新苗长至2.3cm左右时，即开始下一个阶段；⑥炼苗移栽：将长高至10‑15cm、长根≥５根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1‑3天后打开瓶盖，在25‑28℃，湿度70‑80％，光强７100‑7900lx条件下炼苗3‑5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩=3∶2∶2 的混合基质中，温度控制在28℃，前5d 湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。