[发明专利]在体内具有延长的半衰期和增强的红细胞生成活性的重组人EPO‑Fc融合蛋白

摘要

描述了包含连接至免疫球蛋白肽部分的人促红细胞生成素肽部分的重组融合蛋白。所述融合蛋白具有相比天然发生的或重组的天然人促红细胞生成素而言延长的体内半衰期。在本发明的一个实施方案中，所述蛋白质的体内半衰期为天然人促红细胞生成素的至少3倍。所述融合蛋白还展现出相比天然人促红细胞生成素而言增强的红细胞生成生物活性。在一个实施方案中，所述融合蛋白包含人促红细胞生成素(EPO)分子的完整肽序列和人免疫球蛋白IgG1的Fc片段的肽序列。在所述融合蛋白中的Fc片段包含人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2和CH3结构域。所述EPO分子可直接连接至Fc片段以避免外来肽连接体，并当在体内施用时减少免疫原性应答的风险。在一个实施方案中，所述铰链区是在第6位氨基酸处具有非半胱氨酸残基的人Fc片段变体。本发明还涉及编码所述融合蛋白的核酸和氨基酸序列，以及用于产生所述融合蛋白的经转染的细胞系和方法。本发明进一步包括包含所述融合蛋白的药物组合物，和使用所述融合蛋白和/或所述药物组合物(例如在需要治疗的受试者中刺激红细胞生成)的方法。

主权项

重组融合蛋白，其由下列部分组成：(a)具有临近其C末端的半胱氨酸残基的促红细胞生成素肽部分，其中促红细胞生成素肽部分是完整的人促红细胞生成素分子；和(b)包含铰链区的免疫球蛋白肽部分，其中所述免疫球蛋白肽部分是包含所述铰链区和CH2和CH3结构域的人IgG Fc片段，其中所述IgG Fc片段是IgG1片段，其中在铰链区中于第一个半胱氨酸残基处用甘氨酸进行单个氨基酸替代，其中所述铰链区直接偶联至所述促红细胞生成素肽部分；其中在所述单个氨基酸替代后，位于最靠近所述促红细胞生成素肽部分处的所述铰链区的半胱氨酸残基与所述促红细胞生成素肽部分的所述半胱氨酸残基相隔至少12个氨基酸；并且其中所述融合蛋白具有相比天然发生的或重组的天然人EPO而言延长的体内半衰期和增强的红细胞生成特性。