[发明专利]鸡新城疫诊断用抗原制备方法

摘要

本发明涉及鸡新城疫诊断抗原制备工艺流程，对如下环节进行详细的说明与阐述，包括制备抗原用种毒的筛选、优化，培养病毒用种胚选择，孵化要求、收获培养物，甲醛灭活工艺，浓缩过程等等。采用该优化工艺制备的鸡新城疫诊断抗原具有效价稳定、保存时间长、测定抗体滴度准确等特点。

主权项

一种鸡新城疫诊断用抗原制备方法，其特征在于：(1)病毒种毒  该抗原是用鸡毒株为新城疫病毒La Sota‑C8株作为抗原生产毒株的，该病毒已于2011年12月13日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.5576；(2)种蛋  选用美国Merial公司9～10日龄的SPF鸡胚进行培养，要求种蛋大小均匀、表面清洁、受精率高、孵化率高、纯净无任何外源病毒或细菌污染；(3)孵化  先对孵化器进行甲醛熏蒸消毒。温度：一般在37.5℃～38℃之间。湿度：立体孵化器的最适宜孵化湿度75％；通风换气：随着鸡胚的发育，产生的热量增多，同时对氧气的需要量也逐渐增大，要保持孵化器内空气新鲜，风扇转速一般为60～180r/min；(4)收获  接种种毒后的鸡胚，后孵化要求温度36.5℃、湿度55％～60％，培养96～120小时；逐个无菌收获鸡胚尿囊液，混合均匀后成为制备抗原的病毒液；(5)灭活  按病毒液体积的1‰体积(V/V)加入福尔马林溶液，置于100～120r/min摇床上摇晃，于2℃～8℃灭活间48小时；(6)浓缩工艺  采用美国Millipore高密度浓缩机对抗原用病毒液进行浓缩，去除大分子杂蛋白、尿酸盐等外源杂质干扰，提高病毒液的纯度和效价；(7)抗原效价  抗原的病毒HA价达到211；病毒EID50达109.3～109.7/0.1ml。